真菌D葡聚糖：血清1，3—β—D—葡聚糖检测对深部真菌病确诊的研讨

靳颖+王俊妨+周鑫+等

[摘要] 意图 评论血清（1，3）-β-D-葡聚糖对深部真菌病的确诊价值。 办法 将2014年2～6月天津市武警后勤学院隶属医院110份数据（标本140份）分为侵袭性真菌病患者组33例和无侵袭性真菌病组77例，剖析比较葡聚糖水平，并运用ROC曲线断定最佳临界值。 成果 侵袭性真菌病患者组的葡聚糖水平（279.78±83.26）pg/mL，显着高于对照组（34.05±9.35）pg/mL（P<0.001）；ROC曲线下面积为0.946（95%的置信区间为0.904～0.988），当以95.20 pg/mL为临界值时，试验的敏感度、特异度、阳性猜测值和阴性猜测值别离为84.8%、93.5%、80.0%和93.3%；临床契合率到达89.1%。Kappa值0.784（P<0.05）。 定论 血清葡聚糖水平能够用于深部真菌感染的确诊，本研讨顶用北京金山川公司的GKT-1M Set动态真菌检测试剂盒检测血清葡聚糖水平，进行深部真菌感染确诊时的最佳临界值为95.20 pg/mL，当以此临界值对深部真菌感染进行确诊时，临床一致性较好。

[关键词] 深部真菌病；确诊；血清1，3-β-D-葡聚糖；ROC曲线

[中图分类号] R392.7 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）25-0102-03

Study on diagnostic value of serum （1，3）-β-D-Glucan detection for deep fungal disease

JIN Ying WANG Junfang ZHOU Xin WANG Hongzhi

Clinical Laboratory Department， Affiliated Hospital of Armed Police Logistics，Tianjin 300162， China

[Abstract] Objective To investigate the diagnostic value of serum（1，3）-β-D-glucan for deep fungal disease. Methods 110 copies of data（140 specimens） of affiliated hospital of tianjin Armed Police logistics academy from February to June 2014 were divided into the invasive fungal disease group with 33 copies and the non-invasive fungal disease group with 77 copies. The glucan levels were analyzed and compared. The ROC curve was used to determine the optimal critical value. Results The glucan level of the invasive fungal disease group was （279.78±83.26） pg/mL， which was significantly higher than the（34.05±9.35）pg/mL of the control group（P<0.001）. The ROC area under curve was 0.946（95% confidence interval was 0.904-0.988）； When 95.20 pg/mL was used as the critical value， the sensitivity， specificity， positive predictive value and negative predictive value of experiment were 84.8%， 93.5%， 80.0% and 93.3%. The clinical accordance rate reached 89.1%. The Kappa value was 0.784 （P<0.05）. Conclusion The serum glucan level can be used for the diagnosis of deep fungal infection. This study uses the GKT-1M Set dynamic fungal detection kit of Beijing Jinshan Company to detect the serum glucan level. The optimal critical value for deep fungal infection diagnosis is 95.20 pg/mL and when this critical value is used for the diagnosis of deep fungal infection， the clinical consistency is better.

[Key words] Deep fungal disease； Diagnosis； Serum 1，3-β-D-glucan； ROC curve

如今，虽然存在有用的医治办法，可是侵袭性真菌病（invasive fungal disease，IFD）仍然是免疫抑制患者发病和逝世的重要原因[1]。及时、精确的确诊是十分必要的，可是因为非特异性的临床和印象成果、低敏感性的培育办法等[2]，确诊又面临着许多应战。非培育血清抗原确诊办法，如（1，3）-β-D-葡聚糖检测（G试验）和半乳甘露聚糖检测（GM试验）等则使得IFD的前期确诊成为可能[3]。本研讨中，咱们运用MB-80微生物快速动态检测体系，查询了血清（1，3）-β-D-葡聚糖（G试验）在侵袭性真菌病方面的确诊作用，现报导如下。

1 材料与办法

1.1 一般材料

回忆性剖析天津市武警后勤学院隶属医院2014年2～6月确诊侵袭性真菌病患者33例（其间男15例，年纪52～90岁；女18例，年纪29～81岁），均匀64岁，对照组77例（其间男41例，女36例），均匀年纪59岁。相关确诊规范参照欧洲肿瘤研讨医治安排（EORTC）和真菌病研讨组（MSG）对侵袭性真菌病的界说和分类进行判别[4]，整个进程结合临床，患者出院后进行病例剖析总结。

1.2 试剂与仪器

GKT203真菌检测试剂盒（定量）、MB-80微生物快速动态检测体系、T02智能恒温仪，均由北京金山川科技发展有限公司供给。

1.3 标本收集

两组均在早晨空腹用药前采血，别离送血清葡聚糖检测和真菌血培育，依据临床症状，关于高度疑似患者一起进行安排病理学查看。取样进程尽量确保无菌无热原，血培育时将标本接种于规范真菌培育基。最终留取用于检测血清（1，3）-β-D-葡聚糖的标本110 份，其间确诊和高度疑似病例33份，对照组77 份。

1.4 血清（1，3）-β-D-葡聚糖的检测（G试验）

运用无菌无热原真空血清采血管取4 mL静脉血，3000转每分钟离心10 min，得到血清标本，取血清标本上层清液100 μL，加入到900 μL的样品处理液中，摇匀，放入T02智能恒温仪，70℃加热10 min，转移到冷却区冷却5 min，得到处理后的待测样本。取200 μL上述处理后的样本，加入到反响主剂中，混匀后全量转移至无热原平底试管中，一次性刺进MB-80微生物快速动态检测体系，反响1.5 h体系主动计算成果并保存。厂家供给的真菌葡聚糖阳性判别值为100 pg/mL。

1.5 计算学剖析

运用计算软件包SPSS11.0 进行计算学剖析，确诊及高度疑似组、健康组的血清葡聚糖水平记载为[x±s（中位数）]方式，运用独立样本t查验，P<0.05差异具有计算学含义。另制作血清（1，3）-β-D-葡聚糖水平、真菌血培育、安排病理学查看成果的ROC曲线（受试操作特征曲线），依据该办法对敏感度和特异度的要求，断定血清（1，3）-β-D-葡聚糖检测用于确诊侵袭性真菌病的最佳临界值，运用一致性查验Kappa值，判别一致性契合度，P<0.05为差异有计算学含义。

2 成果

2.1 两组血清（1，3）-β-D葡聚糖水平比较

侵袭性真菌病患者组的葡聚糖水平[（279.78±83.26）（192.10）pg/mL，方差为69687.40 pg/mL2（其间念珠菌感染者均匀水平198.33 pg/mL，曲霉感染者均匀水平232.9 pg/mL，显着高于对照组的葡聚糖水平（34.05±9.35）（18.87）pg/mL，方差为1450.91（pg/mL）2。独立样本t查验的计算值：t=8.023，P<0.05差异有计算学含义。

2.2 真菌培育和安排病理学查看成果

33例确诊和高度疑似深部真菌病患者中，血清（1，3）-β-D-葡聚糖检测28例阳性，5例阴性。血培育出22例阳性，其他11例通过安排病理学确诊。血培育成果：白色念珠菌11例，润滑念珠菌5例，克柔念珠菌2例，近滑润念珠菌2例，季也蒙念珠菌2例；安排病理学查看黄曲霉3例，安排胞浆菌2例，黑曲霉2例，毛霉菌2例，烟曲霉1例，念珠菌1例。

2.3 血清（1，3）-β-D葡聚糖检测的敏感性和特异性

血清葡聚糖用于确诊侵袭性真菌病ROC曲线下面积为0.946（渐进95%的置信区间为0.904～0.988），见图1。

图1 血清葡聚糖用于确诊侵袭性真菌病ROC曲线

不同血清葡聚糖水平作为临界值时的敏感度和特异度见表1。当以95.20 pg/mL为临界值时，本办法对侵袭性真菌病的确诊敏感度、特异度、阳性猜测值、阴性猜测值别离为84.8%、93.5%、80.0%和93.3%，作用较为抱负。

表1 不同血清葡聚糖水平作为临界值时的敏感度和特异度

3 评论

近年来，因为免疫抑制剂和广谱抗生素以及抗肿瘤药物的很多运用，侵袭性真菌病的发病率不断添加[5]，一起因为短少前期确诊办法，延迟了真菌药物医治，部分侵袭性真菌病在尸检时才干确诊出来，导致IFD的病死率逐年升高。真菌血培育是侵袭性真菌病的传统确诊手法，可清晰确诊成果并进行相应的药敏试验，但阳性率很低，安排病理学检测往往需求侵入性手法取得标本[6]。因而侵袭性真菌病的前期快速精确确诊显得尤为重要。

血清（1，3）-β-D-葡聚糖检测（G试验）敏感度和特异度较高，可前期快速清晰是否具有深部真菌感染[7]。在欧洲癌症医治研讨安排/真菌病研讨组（EORTC/ MSG）确诊侵袭性真菌病的规范中，现已将G试验接连2次阳性成果作为阳性判别规范[4]。（1，3）-β-D-葡聚糖是许多真菌细胞壁的首要成分，占真菌细胞壁成分的50%以上，其方式以（1，3）-β-糖苷键衔接的葡萄糖残基骨架作为主链，分支状（1，3）-β-D-葡聚糖残基作为侧链。这些真菌包含念珠菌、曲霉菌、镰刀菌和肺孢子菌等，而细菌、病毒以及人体细胞中则不含有（1，3）-β-D-葡聚糖。因为（1，3）-β-D-葡聚糖仅特异性存在于真菌的细胞壁中，占真菌细胞壁成分的50%以上，真菌进入人体血液或体系性安排后，通过吞噬细胞的吞噬消化等处理，（1，3）-β-D-葡聚糖能够从真菌细胞壁中开释出来，导致血液和其他体液（如尿、脑脊液、腹水、胸水等）中的葡聚糖含量增高[8]，而在浅部真菌感染中，（1，3）-β-D-葡聚糖不会进入血液等体液中，所以体液中葡聚糖的的量不会增高。当患者患有侵袭性真菌病时，血清中（1，3）-β-D-葡聚糖浓度会显着增高，因而能够依据血清葡聚糖的浓度判别患者是否患病[9]。本研讨中，G试验对接合菌和重生隐球菌的感染呈阴性，首要是因为接合菌（包含毛霉和根霉）细胞壁中（1，3）-β-D-葡聚糖含量较少、而重生隐球菌的荚膜较厚，影响（1，3）-β-D-葡聚糖的开释，使得（1，3）-β-D-葡聚糖无法被检测到[10]。

现在国产用于（1，3）-β-D-葡聚糖检测的商品化试剂盒首要以北京金山川科技发展有限公司出产的真菌动态检测试剂盒为主，依据患者临床情况和试剂自身的特色，当以95 pg/mL为临界判别值时，灵敏度和特异度都很好，临床契合率也较高。依据病理安排学，并结合血培育成果是否为阳性判别该办法的敏感度与特异度，本研讨以为，运用GKT-1M Set动态真菌检测试剂盒确诊侵袭性真菌病的最佳临界值为（1，3）-β-D-葡聚糖浓度95.20 pg/mL。当以血清（1，3）-β-D-葡聚糖水平95.20 pg/mL为临界值对侵袭性真菌病的确诊敏感度、特异度、阳性猜测值、阴性猜测值别离为84.8%、93.5%、80.0%和93.3%，临床契合率到达89.1%，一致性查验Kappa值为0.748（P<0.05），阐明G试验和血培育具有十分好的契合度。

临床工作中侵袭性真菌病患者血清（1，3）-β-D-葡聚糖水平的检测具有其局限性：依据文献报导，G试验呈现假阳性的原因包含：①运用纤维素膜进行血液透析[11]；②静脉输注免疫球蛋白[12]；③标本或患者创伤触摸纱布或其他含有葡聚糖的物质[13]；④患者伴有较重的溶血（血红蛋白在5.88 g/L以上）；⑤某些链球菌感染会发生葡聚糖或葡聚糖类似物等[14]。此外，其他导致假阳性的要素还需求进一步的证明，如运用香菇多糖类的抗肿瘤药物、放化疗后因为消化道黏膜受损而使食物或肠道定植念珠菌的（1，3）-β-D-葡聚糖进入血液及，承受真菌来历的抗生素医治等[15]。因为导致G试验假阳性原因较多，所以在G试验的临床运用中，关于阳性的患者，应结合多种确诊手法，归纳进行剖析[16]，在试验进程中也要引起留意。

国外报导的多中心对照研讨标明，侵袭性念珠菌、曲霉菌和镰刀菌感染在相同临界值下的G试验的灵敏度和特异度都较高[17]。在本次研讨中，咱们的试验成果也证明了这一点。这也提示咱们，血清G试验能够广泛运用于除接合菌、隐球菌外多种真菌的检测。

总归，血清中（1，3）-β-D-葡聚糖的水平可用于侵袭性真菌病的确诊。本研讨顶用北京金山川公司的GKT-1M Set动态真菌检测试剂盒，检测血清中（1，3）-β-D-葡聚糖的水平，最佳临界值为95.20 pg/mL，当以此临界值进行确诊时，临床一致性较好。

[参考文献]

[1] Theel ES，Doem CD. β-D-glucan testing is important for diagnosis of invasive fungal infections[J]. J Clin Microbiol， 2013，51（11）：3478-3483.

[2] 左向华，陈建魁. 侵袭性真菌感染患者（l，3）-β-D葡聚糖检测的临床价值[J]. 世界查验医学杂志，2010，31（3）：220-223.

[3] 金欣，陈建魁，左向华. 血清半乳甘露聚糖、（l，3）-β-D葡聚糖和真菌核酸检测对侵袭性真菌感染的前期确诊价值研讨[J]. 临床查验杂志，2012，1 （2）：98-103.

[4] De Pauw B，Walsh TJ，Donnelly JP. Revised definitions of invasive fungal disease from the European organization for research and treatment of cancer/invasive fungal infections cooperative group and the national institute of allergy and infectious diseases mycoses study group （EORTC/MSG） consensus group[J]. Clinical Infectious Diseases，2008，46（12）：1813-1821.

[5] 李光迪，王应芳，施鑫鹤，等. 血清（l，3）-β-D葡聚糖在深部真菌感染确诊中的运用[J]. 中华医院感染学杂志，2010，20（20）：3244-3246.

[6] 刘春玉，王红，任爱民，等. 血浆（l，3）-β-D葡聚糖确诊深部真菌感染的临床研讨[J]. 我国真菌学杂志，2012，7（4）：207-210.

[7] Metan G，Koc AN，Kaynar LG，et al. what is the ro1e of the（1，3）-β-D-glucan assay in the screening of patients undergoing autologous haematopoietic stem-cell transplantation[J]. Mycoses，2013，56（1）：34-38.

[8] YoshidaM，RothRI，GrunfeldC，et al. Soluble 1，3-β-D-glucan purified from Candida albicans：biologic effects and distribution in blood and organs inrabbits[J]. J Lab Clin Med，1996，128（1）：103-114.

[9] 王东浩，高心晶，魏路清，等. 校对念珠菌定植指数在重症侵袭性念珠菌感染抢先医治中的运用-多中心前瞻性随机对照临床研讨[J]. 我国危重病急救医学，2009，2（9）：525-529.

[10] 李培，苏欣，施毅. 1，3-β-D葡聚糖检测确诊真菌感染的价值[J]. 中华结核和呼吸杂志，2015，38（1）：62-65.

[11] 胡毓，安黄梅，王卫萍，等. 菌血症患者（l，3）-β-D葡聚糖成果剖析[J]. 现代查验医学杂志，2011，26（2）：49-52.

[12] Duffner U，Abdel-Mageed A，Dahl K.Serum （1，3）-β-D-glucan levels（Fungitell assay）is not useful as a screening test for recipients of an allogeneic HSCT while on immunoglobulin replacement[L]. Bone Marrow Transplant，2012，47（1）：151-152.

[13] O. Albert，D. Toubas，C. Strady. Reactivity of（1，3）-β-D-glucan assay in bacterial bloodstream infections[J]. Eur J Clin Microbiol Infect Dis （2011） 30：1453-1460.

[14] Racil Z，Kocmanova I，Lengemva M. Difficulties in using （1，3）-β-D-glucan as the screening test for the early diagnosis of invasive fungal infections in patients with haematologieal malignancies-high frequency of false-positive results and their analysis[J]. J Med Microbiol，2010，59（9）：1016-1022.

[15] Koo S，Baden LR，Many FM. Post-diagnostic kinetics of the （1，3）-β-D-glucan assay in invasive aspergilosis，invasive candidiasis and Pneumocystis jirovecii penumonia[J].Clin. Microbiol Infect，2012，18（5）：E122-127.

[16] 孙康德，方敏，陈福祥等. 血浆（l，3）-β-D葡聚糖检测对侵袭性肺部真菌感染的临床运用价值[J]. 世界查验医学杂志，2012，33（17）：2071-2072.

[17] Karageorgopoulos DE，Qu JM，Korbila IP. Accuracy of β-D-glucan for the diagnosis of Pneumocystis jirovecii pneumonia：a meta-analysis[J]. Clin Microbial Infect，2013， 19（1）：39-49.

（收稿日期：2015-03-19）