九味镇心颗粒 正交实验法优选九味阿胶膏提取工艺研讨

张洁　李成网

【摘要】意图优选九味阿胶膏的最佳提取工艺。办法以黄芪甲苷的含量为目标，ELSD-HPLC法测定目标成分含量，选用正交实验规划调查加水倍数（A）、煎煮时刻（B）、煎煮次数（C）三个要素的影响，断定九味阿胶膏的最佳提取工艺。成果煎煮要素按影响巨细顺次是煎煮次数（c）>加水倍数（A）>加醇倍数（B），最佳提取工艺条件为：A282C3。定论该制备工艺合理可行。

【关键词】九味阿胶膏；正交实验法；ELSD-HPLC；黄芪甲苷

【中图分类号】R284.1 【文献标识码】B 【文章编号】2095-0616（2015）21-51-03

九味阿胶膏是安徽省中医药大学第二隶属医院临床运用多年的经历膏方。该方由阿胶、黄芪、山楂、枸杞等九味中药材加工精制而成。具有补肝肾，养精血，益气健脾，养心安神，滋阴润肺，温经散寒之成效。临床上首要用于医治气血两虚证。本文选用正交实验法，以黄芪甲苷的含量为目标，对九味阿胶膏的提取工艺进行调查，挑选最佳的提取工艺。

1仪器与试药

LC-20AT型高效液相色谱仪（日本岛津），Sedex75 ELSD检测器；梅特勒xp56型百万分之一电子天平（瑞士）；梅特勒AG285电子剖析天平（瑞士），黄芪甲苷（110781-200512）、乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯），水（超纯水），其他试剂均为剖析纯。黄芪等药材购自合肥市中药饮片厂义和堂药店。

2办法

2.1正交工艺规划

挑选加水倍数（A）、煎煮时刻（B）、煎煮次数（C）为调查要素，种要素取3个水平，要素水平设置，见表1。

2.2黄芪甲苷含量测定

2.2.1色谱条件 色谱柱：Shim Pack CLCODS柱（250×4.6mm，5μm）；活动相：乙腈-水（32：68）；柱温为30℃；流速为1.0mL/min；ELSD漂移管温度为83℃；氮气压力为2.0bar；理论板数按黄芪甲苷核算应不低于4000。

2.2.2对照品溶液的制备 精细称取黄芪甲苷对照品（110781-200512）10.077mg，加甲醇溶解并定容至25mL，摇匀，即得。

2.2.3供试品溶液的处理 按九味阿胶膏处方，称取黄芪17.7g，山楂15g及其他煎煮药材共111g，按L₉（34）正交表（见表2），以水平要素表（见表1）规则的加水量、煎煮时刻、煎煮次数煎煮，滤过，兼并滤液，恰当浓缩并定容至500mL量瓶，摇匀。精细量取正交实验1～9号溶液各25mL，置分液漏斗中，加水饱满的正丁醇溶液25mL，振摇提取4次，分取正丁醇液，兼并4次提取液，加2%氢氧化钠溶液25mL，萃取2次，弃去氢氧化钠溶液，正丁醇液再加水25mL，萃取2次，弃去水液，正丁醇液水浴挥干，残渣以适量甲醇溶解，定量转移置5mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以0.45μm滤膜滤过，即得正交实验的9份供试品溶液。

2.2.4对照品溶液线性关系调查别离精细汲取黄芪甲苷对照品溶液（0.4031mg/mL）2、4、8、12、16、20μL，依法测定峰面积，以黄芪甲苷进样质量的常用对数值为横坐标，黄芪甲苷峰面积的常用对数值为纵坐标，制作规范曲线，得回归方程为：IgA=1.38551gC+1.9782（r=0.9998，n=6）。成果标明：黄芪甲苷的质量在0.8062～8.062μg之间质量的常用对数值与峰面积的常用对数值呈杰出的线性关系。

2.2.5精细度实验 精细汲取黄芪甲苷对照品溶液（0.4031mg/mL）20μL，接连进样6次，依法测定峰面积积分值，核算，RSD=0.65%，阐明仪器的精细度杰出。

2.2.6供试品溶液的测定按照上述色谱条件，精细汲取正交实验1～9号供试品溶液各20μL，依法测定。色谱图见图1～2。

3成果

3.1正交实验

依据上述色谱条件，顺次测定9份供试品溶液中黄芪甲苷的峰面积，将峰面积积分值的常用对数代入规范曲线，核算黄芪甲苷的含量，正交实验成果见表2，方差剖析见表3。

由方差剖析成果可知，各要素显著性差异顺次为C>A>B，即煎煮次数>加水倍数>煎煮时刻。方差剖析显现要素A和要素C的影响具有显著性差异，其间A3>A2>A1，C3>C2>C1，要素B的影响无显著性差异。因而，终究断定的最佳提取工艺为A382C3，即加10倍量水，煎煮3次，每次1.5h。

3.2验证实验

按照处方，称取黄芪17.7g，山楂15g及其他煎煮药材共111g，按上述优选的工艺条件煎煮，平行实验3次，成果黄芪甲苷均匀含量为16.0212mg，RSD=1.39%。标明工艺条件安稳可行。

4评论

九味阿胶膏由九味中药材组成，阿胶为方中君药，但因阿胶是烊化后与清膏兼并，不参加煎煮，故本文未挑选君药的有用成作为调查目标。而黄芪为方中成药，其首要有用成分有多糖类、黄酮类、皂苷类和氨基酸等。2010版我国药典收载了黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定，但由于毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量较低，仅为黄芪甲苷含量的一半，且黄酮类成分简略被搅扰，故本研讨未选用毛蕊异黄酮葡萄糖苷作为含量测定目标。ELSD-HPLC法测定中药复方中黄芪甲苷含量的论文报导较多，在参阅文献的基础上，本研讨挑选黄芪甲苷作为含量测定的覆按目标。在正交实验之前，还调查了药材吸水率实验，均匀吸水率为1.1倍，故第一次煎煮的加水量多加1.1倍的水。

现在，大多数中医院运用的院内制剂工艺都比较简略，多为生药粉制备的丸剂或简略的水煎剂，本研讨办法和成果能够给医院的制剂工艺优化供给参阅和依据，也能够给含黄芪的复方制剂的含量测定供给参阅。

依据黄芪甲苷含量的测定成果，煎煮时刻对成果的影响未见显著性差异，故从节省本钱的视点考虑，工业化出产时可挑选只煎煮1h。最终的验证实验也很好的阐明晰，本文挑选的工艺条件是合理的，可重复的，合适工业化出产的。endprint