HT-3细胞：丙戊酸对HL—60/HT细胞耐药性的影响

胡建锋++尹松梅++谢双锋++聂大年++李益清

[摘要]意图 讨论丙戊酸（VPA）对耐三尖杉酯碱的HL-60细胞（HL-60/HT）耐药性的影响。办法 挑选递加压力培育法树立HL-60/HT细胞株。分为三组，Ara-C组、VPA组、VPA+Ara-C组，选用MTT法测定运用各组药物后灵敏细胞、耐药细胞增殖状况的改动，一起测定丙戊酸对HL-60/HT细胞耐药性的改动，用流式细胞仪检测灵敏的HL-60细胞及HL-60/HT细胞的细胞周期。成果 丙戊酸与Ara-C合用可显着按捺HL-60、HL-60/HT细胞成长，按捺率高于丙戊酸或Ara-C独自的效果（q=1.37、1.51）。結论 丙戊酸可以按捺HL-60、HL-60/HT细胞成长，可与Ara-C发挥协同效果，下降白血病细胞的耐药性。

[关键词]丙戊酸；HL-60/HT细胞；白血病

[中图分类号] R733.7 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）04（c）-0067-03

[Abstract]Objective To explore the impact of Valproic Acid （VPA） on drug resistance of HL-60 cells（HL-60/HT） resistant harringtonine.Methods HL-60/HT cell strain was established by incremental pressure culture and divided into 3 groups：Ara-C group，VPA group and VPA+Ara-C group.MTT method was used to determine the change of proliferation of sensitive cells and drug resistant cells after using drug.The change of VPA resistance in HL-60/HT cells was determinated simultaneously.The cell cycle of seneitive HL-60 cells and HL-60/HT cells were detected by flow cytometry.Results VPA in combination with Ara-C can obviously inhibit the growth of HL-60 and HL-60/HT cell，and the inhibition rate was higher than that of VPA or Ara-C alone （q=1.37，1.51）.Conclusion VPA can inhibit the growth of HL-60 and HL-60/HT cell.It can play a synergistic role with Ara-C and reduce the drug resistance of leukemia cells.

[Key words]Valproic acid；HL-60/HT cell；Leukemia

白血病的首要医治办法是联合化疗，据统计60%～70%的患者经联合化疗后症状缓解，但短期内易复发，首要原因是白血病细胞固有或取得的多药耐药性[1-6]。本研讨旨在讨论VPA对耐三尖杉酯碱（HT）的HL-60细胞（HL-60/HT细胞）耐药性的影响。

1资料与办法

1.1 试剂与资料

RPMI1640培育基（LM-R1641/500）、二甲基亚砜（DMSO）（20161020 AR）购自博升生物公司；四氮唑蓝（MTT）（B00718301）、VPA（B 2016110402）为贝斯特试剂公司产品；胎牛血清（13011-8611）购自杭州四季青公司；淋巴细胞别离液（E501064-0001）、D-Hank液（160922-1）购自上海生工生物工程公司；HT（20161006002）、Ara-C（20161120001）为Pharmacia & Upjohn公司产品；RNA酶（160910-2）、碘化丙啶（PI）（161104-1）购自上海华联制药有限公司。HL-60细胞自中山大学药学院引入。

1.2 细胞培育及耐药株的树立

HL-60细胞接种于 RPMI1640 彻底培育基，置于37℃、5%CO2培育箱中，每2 天换液1次，细胞4～5 d传代1次。

选用极限稀释法挑选耐药的细胞克隆，具体办法为：取处于对数增长期的HL-60细胞，用递加压力挑选培育法树立HL-60/HT耐药细胞株。开始时HT的浓度为0.005 μg/ml，培育2 d后换液并洗去药物，无药物环境中培育2 d。以此浓度培育3次后，将药物浓度改为0.01 μg/ml，并逐步加大HT浓度。5个多月后，培育出HL-60/HT耐药细胞，选用MTT法检测细胞对药物的对折按捺浓度（IC50），承认耐药细胞。

1.3 对耐药细胞和灵敏细胞增殖按捺率的检测

设Ara-C效果HL-60细胞组和HL-60/HT细胞组、VPA效果HL-60细胞组和HL-60/HT细胞组、VPA+Ara-C效果HL-60细胞组和HL-60/HT细胞组，别离用MTT法别离测定Ara-C组、VPA组、VPA+Ara-C组对HL-60/HT细胞和HL-60细胞的增殖按捺率。将重悬细胞浓度调整为1×105/ml，以每孔200 μl接种于96孔平板，置37℃、5%CO2环境中孵育24 h。然后向每孔中加Ara-C或VPA或VPA+Ara-C。两种细胞均设置无细胞培育液组和无药对照组。48 h后参加20 μl MTT（终浓度为5 g/L），持续孵育4 h，去除培育液，加DMSO 150 μl，振动10 min混匀，以无细胞培育液组调零，用酶标仪别离测定595 nm和492 nm处的吸光度值（A值）。不同条件下每次均设8个平行孔，重复3次。细胞成长按捺率=（无药对照组A值均值-实验组A值均值）/无药对照组A值均值×100%。用直线回归法核算各种药物的IC50。