非小细胞肺癌是什么意思：晚期非小细胞肺癌中ERCC1、β—tubulin3及TOPOⅡ的表达与临床病理特征及铂类化疗效果的联系

张新年+姜维美+韩磊+孙咏梅

[摘要]意图 探討ERCC1、β-tubulin 3及TOPOⅡ在晚期非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达与临床病理特征及与铂类化效果果的联系。办法 选取2012年1月～2013年6月在我院医治的61例晚期NSCLC住院患者作为研讨目标，选用免疫组化办法检测其安排中ERCC1、β-tubulin 3及TOPOⅡ的表达，患者均承受培美曲塞联合奈达铂计划化疗并定时点评效果。成果 ERCC1、β-tubulin 3的表达与患者的年纪、性别、临床分期及安排学类型均无关（P>0.05）；TOPOⅡ的表达与患者的年纪、性别、临床分期无关（P>0.05）；TOPOⅡ在腺癌中阳性表达8例（22.86%），鳞癌阳性表达14例（53.85%），鳞癌的表达高于腺癌，差异有统计学含义（P=0.017）。ERCC1、β-tubulin 3及TOPOⅡ的阳性表达分别为40.98%（25/61）、47.54%（29/61）及36.66%（22/61），阳性表达化疗有效率分别为16.00%（4/25）、48.28%（14/29）及63.64%（14/22），阴性表达化疗有效率分别为63.89%（23/36）、40.63%（13/32）及33.33%（13/39）。定论 ERCCI及TOPOⅡ阳性可猜测NSCLC对铂类化疗药物的效果，且TOPOⅡ对不同安排学类型的晚期非小细胞肺癌效果猜测具有重要含义。

[关键词]非小细胞肺癌；ERCC1；β-tubulin 3；TOPOⅡ；免疫组化

[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）12（b）-0007-04

Expression of ERCC1，β-tubulin 3 and TOPO Ⅱ in advanced non-small-cell lung cancer and their relationship with clinical pathological features and efficacy of platinum based chemotherapy

ZHANG Chun-jie1 JIANG Wei-mei2 HAN Lei1 SUN Yong-mei1

1.Department of Pathology，the Second People′s Hospital of Lianyungang City in Jiangsu Province，Lianyungang 222000，China；2.Department of Oncology，the Second People′s Hospital of Lianyungang City in Jiangsu Province，Lianyungang 222000，China

[Abstract]Objective To explore the expressions of ERCC1，β-tubulin 3 and TOPO Ⅱ in advanced non-small-cell lung cancer （NSCLC） and their correlations with clinical pathological features and efficacy of platinum based chemotherapy.Methods 61 patients with NSCLC in our hospital from January 2012 to June 2013 were selected as the study subjects，mmunohistochemical method was used to detect the expression of tissue ERCC1 and β-tubulin 3 and TOPO Ⅱ，All the patientswere treated with Pemetrexed combined with Nedaplatin chemotherapy，and the efficacy was evaluated on a regular.Results The express of ERCC1 and β-tubulin 3 was not related to the age，sex，clinical stage and histological type of the patient （P>0.05）.The expression of TOPO Ⅱ was not related to the age，sex，and clinical stage of the patients （P>0.05）.The positive expression of TOPO Ⅱ in adenocarcinoma was 8 cases （22.86%），14 cases （53.85%） were positive in squamous cell carcinoma，and the positive expression of ERCC1，β-tubulin 3 and TOPO Ⅱ in squamous cell carcinoma was higher than that in adenocarcinoma，with significant difference （P=0.017）.The positive expression of ERCC1，β-tubulin 3 and TOPO Ⅱ were 40.98% （25/61），47.54% （29/61） and 36.66% （22/61） respectively，the effective rate of positive expression of chemotherapy was 16.00% （4/25），48.28% （14/29） and 63.64% （14/22），the effective rate of negative expression of chemotherapy was 63.89% （23/36），40.63% （13/32） and 33.33% （13/39）.Conclusion The positive expression of ERCCI and TOPO Ⅱ can predict the efficacy of NSCLC in the treatment of platinum based chemotherapy drugs，and TOPO Ⅱ has important significance for the prognosis of advanced NSCLC with different histological types.

[Key words]Non-small-cell lung cancer；ERCC1；β-tubulin 3；TOPO Ⅱ；Immunohistochemistry

现在，肺癌是导致全球肿瘤患者逝世的最首要原因，其间80%～85%为非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC），手术是Ⅰ～Ⅱ期及部分ⅢA期NSCLC患者的首要医治办法之一，虽术后给予辅佐化疗，但生计率改进欠安，有研讨显现，其5年生计率较前仅改进5%左右[1-2]。临床中，约3/4的患者确诊时已是晚期，失去了手术时机，首要的医治手法为化疗[3]。近年来，以铂类为根底的第三代联合化疗计划是NSCLC一线医治的金规范，但肿瘤细胞对其的耐药性仍很高，往往导致医治失利。跟着对功能性基因组研讨的深化，近年来，切除修正穿插互补基因1（excision repair cross-completion 1，ERCC1）在铂类耐药中的效果日益受到重视，β-微管蛋白3（β-tubulin 3）的表達与紫杉类耐药密切相关[4]，而国外有学者报导其表达与铂类耐药也存在相关性。近十年来，拓扑异构酶Ⅱ（toposiomerase-Ⅱ，TOPOⅡ）也被视为一种新的耐药相关基因，被以为是化疗失利的原因之一。本研讨选用免疫组化办法检测剖析NSCLC患者安排ERCC1、β-tubulin 3及TOPOⅡ的表达情况，评论ERCC1、β-tubulin 3及TOPOⅡ的表达与铂类效果的联系，为基因检测在肿瘤个体化医治中的使用供给必定的理论根底。

1材料与办法

1.1一般材料

选取2012年1月～2013年6月在我院医治的61例住院患者作为研讨目标，一切患者均经过病理确诊为NSCLC，均为初诊医治。其间男性45例，女人16例；年纪46～75岁，中位年纪60岁；鳞癌26例，腺癌35例；ⅢB期29例，Ⅳ期32例；膂力情况（PS）评分≤2分；医治前肝肾功能、血惯例及心电图均正常；估计生计时刻≥3个月；有可测量的临床目标（CT、MIR等）。患者均承受培美曲塞联合奈达铂计划化疗4～6个周期，每2个周期点评效果。

1.2化疗计划及所用试剂

培美曲塞：第1天给药，500 mg/m2，溶于100 ml生理盐水稀释后，静脉滴注10 min；奈达铂第2天给药，60 mg/m2，溶于500 ml生理盐水稀释后，静脉滴注，滴注时刻>1 h，滴完后持续输液1000 ml；给化疗药之前惯例给予5-HT3受体阻断剂阿扎司琼10 mg静脉滴注以镇吐，21 d为1个周期。医治2个周期。首要试剂：鼠抗人ERCC1单克隆抗体，鼠抗人β-tubulin 3单克隆抗体，鼠抗人TOPOⅡ单克隆抗体，即用型免疫安排化学超敏SP试剂盒（KIT-9701）及DAB染色液（KIT-0017），均购自福建迈新生物技术有限公司。

1.3调查目标及点评规范

调查2周后参照实体瘤效果评判规范进行效果点评，详细如下。彻底缓解（CR）：部病灶消失保持4周，无新病灶呈现；部分缓解（PR）：缩小≥30%保持4周，无新病灶呈现；疾病安稳（SD）：病灶既未缩小≥30%并保持4周也未添加≥20%或呈现新病灶。

免疫组化染色：安排蜡块3 μm切片行免疫组化，ERCC1和TOPOⅡ均阳性表达于细胞核，β-tubulin 3阳性表达于细胞质，以呈现棕黄色颗粒为阳性标志。成果断定：选用随机双盲法阅片，高倍视界下随机选取计数200个肿瘤细胞，调查阳性细胞百分等到阳性染色强度，然后进行评分。细胞计数评分规范：阳性细胞数<10%为0分，10%～25%为1分，>25%～75%为2分，>75%为3分。染色强度评分规范：上色部位不上色为0分，上色部位上色不全为1分，上色部位彻底上色且淡染为2分，上色部位彻底上色且深染为3分。两方面评分相加0～3分为低表达（-），4～6分为阳性表达（+）。

1.4统计学办法

选用SPSS 13.0统计学软件对数据进行处理，各组间计数材料的比较选用χ2查验，以P<0.05为差异有统计学含义。

2成果

2.1 ERCC1、β-tubulin 3及TOPOⅡ在晚期NSCLC安排中的表达

在61例NSCLC中，ERCC1阳性表达25例（40.98%），β-tubulin 3阳性表达29例（47.54%），TOPOⅡ阳性表达22例（36.66%）。

2.2 ERCC1、β-tubulin 3及TOPOⅡ的表达与临床病理特征的联系

ERCC1、β-tubulin 3的表达与患者的年纪、性别、临床分期及安排学类型均无关（P>0.05），TOPOⅡ的表达与患者的年纪、性别、临床分期无关（P>0.05）。TOPOⅡ在腺癌中阳性表达8例（22.86%），在鳞癌中阳性表达14例（53.85%），在鳞癌中的表达高于腺癌，差异有统计学含义（P=0.017）（表1）。

2.3 ERCC1、β-tubulin 3及TOPOⅡ的表达与铂类化效果果的联系

ERCC1阳性表达患者化疗有效率为16.00%（4/25），非阳性表达患者化疗有效率为63.89%（23/36），差异有明显性（P=0.000）；β-tubulin 3阳性表达患者的化疗有效率为48.28%（14/29），非阳性表达患者的化疗有效率为40.63%（13/32），差异无统计学含义（P=0.611）；TOPOⅡ阳性表达患者的化疗有效率为63.64%（14/22），非阳性表达患者的化疗有效率为33.33%（13/39），差异有统计学含义（P=0.032）（表2）。

3评论

跟着全球经济的高速开展以及环境污染的日益加剧，再加上吸烟人群的不断增多，使得肺癌高居全球新增癌症之首，年逝世人数达100多万，且每年的增长率>25%。但现在肺癌的医治和预后仍不能令人满意，这与其易发作、复发、搬运以及化疗药物耐药有很大联系。跟着对功能性基因组研讨的深化，合理的个体化医治成为一种新的趋势，2009年美国临床肿瘤学会年会中提出NSCLC医治更应着重这一准则。铂类经过与肿瘤细胞构成铂-DNA聚合物，导致DNA仿制妨碍，然后按捺肿瘤细胞的割裂增殖，构成杀伤。铂类耐药的重要机制为核苷酸切除修正（nucleotide excision repair，NER）才能增强，经过NER铲除铂-DNA聚合物，导致铂类失效。

ERCC1坐落染色体19q13-2，全长15 kb，含10个外显子，编码含297个氨基酸的蛋白质。ERCC1与DNA修正酶缺少互补基因，构成异源二聚体，具有5′端DNA核酸内切酶活性，可辨认并切除受损DNA5′端，使铂类损害的DNA得到敏捷修正，然后导致耐药的发作。ERCC1活性的凹凸可反映整个NER修正活性的水平[5]，低表达会促进肺癌的发作和复发，但对铂类药物灵敏；阳性表达可削减肿瘤的复发，但易引起耐药的发作[6]。近年来ERCC1表达与铂类耐药之间的联系得到广泛验证，Reynolds等[7]对晚期NSCLC的三期试验进行回忆性研讨，使用荧光定量免疫组化办法检测ERCC1蛋白的表达，发现其与铂类计划效果呈负相关；Olaussen等[8]研讨761例NSCLC患者ERCC1的表达水平，证明阴性表达患者的总生计期显着高于阳性表达患者，且前者使用含铂辅佐化疗可以显着延伸生计期。本研讨成果显现，ERCC1表达阴性组的化療效果显着高于表达阳性组，差异有统计学含义，与现在大都文献的研讨成果共同。Rybárová等[9]对107例NSCLC中的ERCC1蛋白表达进行相关性剖析，以为ERCC1在NSCLC不同安排学类型表达差异无明显性，与本研讨成果共同，因而检测ERCC1的表达有助于猜测患者的预后及对铂类药物的化疗灵敏性，对辅导晚期NSCLC的个体化医治计划可以供给必定的根据。

TOPOⅡ是机体内必不可少的核酶，直接参与DNA的转录、翻译、仿制及染色体别离等进程，首要存在于SG2/M期[10-11]。TOPOⅡ的表达首要有两种效果：①可表现肿瘤细胞的增殖指数；②可作为肿瘤化疗药物效果的靶点，化疗药物经过与TOPOⅡ结合而使DNA仿制和转录反常，阻止肿瘤细胞的增殖。NSCLC肿瘤安排的TOPOⅡ表达水平可直接影响化疗药物的活性，TOPOⅡ表达水平越高，对化疗药物的灵敏性就越高；反之，则导致肿瘤细胞的耐药[12-14]。本研讨成果显现，TOPOⅡ蛋白表达与铂类化效果果呈明显相关，且其表达程度与铂类化疗药物的效果呈正相关，即阳性表达患者铂类化效果果好，阴性表达患者对铂类更易发作耐药，这与上述研讨成果相吻合。

β-tubulin是微管结构的首要组成部分，而微管蛋白是细胞骨架的重要组成部分，在细胞有丝割裂中起重要效果，是紫杉醇类药物效果的靶点。其可分为7种亚型，其间β-tubulin 3的效果最为重要。文献报导，β-tubulin 3表达与紫杉醇类的化效果果具有相关性，而与铂类药物的耐药性是否相关尚不清晰[15-19]。Huang等[20]的研讨成果显现，NSCLC鳞癌患者的β-tubulin 3阳性率与腺癌患者比较，差异无统计学含义。本研讨成果显现，β-tubulin3的表达与铂类药物效果无相关性。

综上所述，ERCCI及TOPOⅡ可作为猜测NSCLC对铂类化疗药物效果的生物学标志物，对临床用药及预后有必定的辅导含义；但β-tubulin 3与铂类效果无清晰相关性，需持续扩展样本量以进行更深化的研讨。

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