肾通明细胞癌 MicroRNA—218miR—218在肾通明细胞癌中的表达及临床意义

任小强　张建国　辛士永　程涛

[摘要] 意图 研讨miR-218在肾通明细胞癌中的表达及其与临床病理之间的联系。办法 搜集2012年3月—2013年5月间在该院就诊的46例病理确诊为肾通明细胞癌安排和30例癌旁≥3.0 cm正常肾安排作为对照组，选用Realtime PCR办法检测microRNA-218在肾通明细胞癌安排和癌旁≥3.0 cm正常肾安排的表达，剖析microRNA-218表达水平与肾通明细胞癌临床病理参数之间的联系。成果 与对照组癌旁正常肾安排比较， miR-218在肾通明细胞癌安排的的表达显着下降 （P<0.001）。一起， miR-218表达的下降与肿瘤的分期，搬运和分解程度有密切联系。miR-218的表达与患者的年纪， 性别， 肿瘤方位及肿瘤巨细无显着计算学含义。可是， miR-218的表达与肿瘤的搬运（P=0.007）， 肿瘤的 T分期 （P=0.022） 及肿瘤的分级 （P=0.015）有计算学含义。定论 miR-218在肾通明细胞癌中和肿瘤分期、分解、搬运有着很大的相关性。miR-218在肾通明细胞癌安排呈下调表达，其或许成为肾细胞癌新的潜在的医治靶点及确诊预后的分子标志物。

[关键词] 肾通明细胞癌（RCCC）； miR-218； 侵袭； 搬运

[中图分类号] R737.11 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）04（b）-0020-02

[Abstract] Objective To investigate the expression of miR-218 in renal clear cell carcinoma and its relationship with clinical pathology. Methods The renal clear cell carcinoma tissue of 46 cases of patients diagnosed with renal clear cell carcinoma in our hospital from March， 2012 to May， 2013 were selected and 30 cases of normal renal tissues ≥ 3.0cm adjacent to carcinoma as the control group. Realtime PCR method was used to detect the expression of microRNA-218 in renal clear cell carcinoma tissue and normal renal tissue ≥ 3.0cm adjacent to carcinoma. The relationship between the expression of microRNA-218 and renal clear cell carcinoma clinicopathological parameters was analyzed. Results Compared with the control tissues， miR-218 expression in the RCCC tissues was significantly lower （P<0.001）. Moreover， low miR-218 was closely associated with the stage， metastasis， and the grade of the tumor. The expression of miR-218 with the patient's age and gender， tumor location and tumor size had no statistical significance. But the expression of miR-218 with the tumor metastasis （P=0.007）， tumor T staging （P=0.022） and tumor grade （P=0.015）， had statistical significance. Conclusion MiR-218 was strongly correlated to RCCC stage， tumor grade， tumor metastasis. MiR-218 was low express in the tissues of RCCC，it may be used as a potential therapeutic target，a diagnostic biomarker and a prognostic predictor in patients with RCCC in future.

[Key words] Renal clear cell carcinoma （RCCC）； miR-218； Invasion； Metastasis 跟着现在分子生物学技能的日新月异以及对恶性肿瘤发作的细胞分子水平研讨的深化，从基因水平寻觅肾癌防治的新途径成为研讨的热门。MicroRNAs（miRNAs）是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功用的非编码RNA，其巨细长约20～25个核苷酸。最近的研讨[1]标明miRNA参加各式各样的调理途径，包含发育、病毒防护、造血进程、器官构成、细胞增殖和凋亡等。miRNA在多种肿瘤中存在表达反常，能够发挥癌基因或抑癌基因效果，它现已显现出能按捺某些重要肿瘤相关基因表达，在肿瘤发作、开展、预后中扮演十分重要的人物[2]。现在有关miR-218的研讨报导不多，miR-218参加了许多肿瘤的发作、开展。该研讨于2012年3月—2013年5月间经过检测microRNA-218在肾通明细胞癌安排中的表达，剖析其与临床病理之间的联系，评论miR-218对肾通明细胞癌安排的影响，然后开始提醒miR-218在肾通明细胞癌中的生物学功用。报导如下。

1 材料与办法

1.1 标本搜集

搜集河南科技大学榜首隶属医院的46例肾细胞癌癌安排及30例癌旁≥3.0 cm正常肾安排作为对照组。一切安排标本均经病理学确诊确以为肾细胞癌。其间肾细胞癌中，低分解11例，中分解17例，高分解18例，依据TNM分期，临床Ⅰ期21例， 临床Ⅱ期13例，临床Ⅲ期8例 临床Ⅳ期4例 ，有淋巴结搬运的14例，无淋巴结搬运的32例，患者年纪28～80岁，平均年纪53.6岁 ，其间男性31例，女人15例。

1.2 RNA提取和 qRT-PCR

选用美国Invotrogen公司的RNA提取试剂盒，抽提安排总RNA。用紫外分光光度计于 260 和280 nm 波利益测定 RNA 提取液的吸光度（D）值，检测 RNA 纯度和浓度。用Invitrogen公司NCode miRNA First-Strand cDNA Synthesis 和 qRT-PCR Kits进行加PolyA尾巴和反转录。操作程序为将消化后RNA 10 μL 、5×反转录缓冲液 4 μL、25 mmol/LMnCl2 2 μL、2 mmol/L ATP 1 μL、Poly A Polymerase 0.4μL、用DEPC 处理后的无酶水补至 20 μL，放置37 ℃15 min， 再取加Poly A后RNA 8 μL、Annealing Buffer 1 μL、 Universal RT Primer（25uM）3 μL，65 ℃孵育5 min，敏捷冰浴2～10 min，时间短离心，持续向以上反响液中参加2xFirst Strand Buffer 10 μL、SuperScriptⅢ RT/RNaseOut Enzyme mix 2 μL悄悄吸打混匀，50 ℃孵育50 min。反响完毕后 85 ℃保温5 min。

运用罗氏公司的7 500型荧光定量PCR仪，选用2-△△CT法进行数据的相对定量剖析。RealTime反响体系为：2x REALSYBRMixture 10 uL、10 umol/Lmir-218 上游引物0.4 μL、10 umol/Lmir-218 下流引物 0.4 μL、反转录产品 2 μL， 参加灭菌蒸馏水至20 μL。扩增程序为：95 ℃ 10 min，（95 ℃15sec，60 ℃60sec）×40个循环。以U6 基因表达作为内参。miR-218 的相对表达量经过公式2-△△CT核算，其间 ΔCt = miR-218Ct 值- U6Ct 值。

1.3 计算办法

选用SPSS17.0软件进行计算学剖析。miR-218在肾细胞癌癌安排与癌旁正常肾安排的表达差异选用独立样本的t查验。miR-218的表达与肾细胞癌临床病理学特征的相关选用非参数Mann Whitney U查验。

2 成果

与对照组癌旁正常肾安排比较， miR-218在肾通明细胞癌安排的的表达显着下降，差异有计算学含义（P<0.001，图A）。一起， miR-218表达的下降与肿瘤的分期，搬运和分解程度有密切联系（图B， 图C，图D）。miR-218的表达与患者的年纪（P=0.817）， 性别（P=0.951）， 肿瘤方位（P=0.914）及肿瘤巨细（P=0.354）差异无计算学含义。可是， miR-218的表达与肿瘤的搬运，差异有计算学含义（P=0.007）， 肿瘤的 T分期，差异有计算学含义 （P=0.022）及肿瘤的分级，差异有计算学含义（P=0.015），见表1。

3 评论

肿瘤的侵袭和搬运仍是肿瘤高死亡率的主要原因。在最新的一些研讨报告中，MiR -218能够按捺肿瘤的发展和侵袭，能够显着下降人类恶性肿瘤发作[3]。但是，miR-218在肾癌中的效果没有进一步的研讨。

该研讨发现，MiR-218在肾通明细胞癌安排中的表达是削减的，显着低于对照组（P<0.001），尤其是在肿瘤晚期，表达显着下降，显现出它在肿瘤发展与侵袭中的效果愈加杰出。miR-218在肾癌中的这种现象契合之前的研讨报导[4-6]。此外，在肿瘤组中， miR-218在晚期肾通明细胞癌安排中的表达水平显着低于前期肾通明细胞癌（P<0.001）。低分解肾通明细胞癌中miR-218的表达水平显着低于高/中分解肾通明细胞癌（P<0.05），有淋巴结搬运的肾通明细胞癌安排中miR-218显现显着低表达（P<0.001）。因为miR-218现已被证明在宫颈腺癌以及许多其他恶性肿瘤中与肿瘤的搬运及侵袭显着相关[7-8]，而该研讨进一步显现miR-218在肾恶性肿瘤的搬运及侵袭中也或许是一个重要的要素[9]。

综上，研讨发现，miR-218在肾细胞癌安排中与分期、分解、搬运是有密切联系的，其表达水平与临床发展呈负相关，miR-218在肾细胞癌中作为一个肿瘤按捺基因，提醒了其或许成为肾癌新的潜在的医治靶点。

[参考文献]

[1] Tu Y， Gao X， Li G， et al. MicroRNA-218 Inhibits Glioma Invasion， Migration， Proliferation， and Cancer Stem-like Cell Self-Renewal by Targeting the Polycomb Group Gene Bmi1[J].Cancer research，2013，73（19）：6046-6055.

[2] Chiyomaru T， Enokida H， Kawakami K， et al. Functional role of LASP1 in cell viability and its regulation by microRNAs in bladder cancer[J].Urologic Oncology，2012，30（4）：434-443.

[3] 杨卫东，王欢，汪静.miRNAs： 肿瘤确诊医治的潜在新式靶分子[J].现代肿瘤医学，2013，21（8）：1873-1879.

[4] 黄晓明，陈翔，贾振宇.人工microRNAs在肿瘤基因医治中的研讨[J].我国细胞生物学学报，2013，35（7）：1018-1026.

[5] Guan H， Wei G， Wu J， et al. Down-regulation of miR-218–2 and its host gene SLIT3 cooperate to promote invasion and progression of thyroid cancer[J].Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism， 2013，89（5）：2346-2352.

[6] Davis BN， Hata A microRNA in cancer—the involvement of aberrant microRNA biogenesis regulatory pathways[J].Genes Cancer，2010（11）：1100-1114.

[7] Hassan MQ， Maeda Y， Taipaleenmaki H， et al. miR-218 Directs a Wnt signaling circuit to promote differentiation of osteoblasts and osteomimicry of metastatic cancer cells[J].Journal of Biological Chemistry，2012，287（50）：84-92.

[8] Gien LT， Beauchemin MC， Thomas G. Adenocarcinoma： a unique cervical cancer[J].Gynecol Oncol，2010，116：140-146

[9] Li Q， Zhu F， Chen P. miR-7 and miR-218 epigenetically control tumor suppressor genes RASSF1A and Claudin-6 by targeting HoxB3 in breast cancer[J].Biochemical and Biophysical Research Communications，2012， 424（1）：28-33.

（收稿日期：2014-01-05）

[3] 杨卫东，王欢，汪静.miRNAs： 肿瘤确诊医治的潜在新式靶分子[J].现代肿瘤医学，2013，21（8）：1873-1879.

[4] 黄晓明，陈翔，贾振宇.人工microRNAs在肿瘤基因医治中的研讨[J].我国细胞生物学学报，2013，35（7）：1018-1026.

[5] Guan H， Wei G， Wu J， et al. Down-regulation of miR-218–2 and its host gene SLIT3 cooperate to promote invasion and progression of thyroid cancer[J].Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism， 2013，89（5）：2346-2352.

[6] Davis BN， Hata A microRNA in cancer—the involvement of aberrant microRNA biogenesis regulatory pathways[J].Genes Cancer，2010（11）：1100-1114.

[7] Hassan MQ， Maeda Y， Taipaleenmaki H， et al. miR-218 Directs a Wnt signaling circuit to promote differentiation of osteoblasts and osteomimicry of metastatic cancer cells[J].Journal of Biological Chemistry，2012，287（50）：84-92.

[8] Gien LT， Beauchemin MC， Thomas G. Adenocarcinoma： a unique cervical cancer[J].Gynecol Oncol，2010，116：140-146

[9] Li Q， Zhu F， Chen P. miR-7 and miR-218 epigenetically control tumor suppressor genes RASSF1A and Claudin-6 by targeting HoxB3 in breast cancer[J].Biochemical and Biophysical Research Communications，2012， 424（1）：28-33.

（收稿日期：2014-01-05）

[3] 杨卫东，王欢，汪静.miRNAs： 肿瘤确诊医治的潜在新式靶分子[J].现代肿瘤医学，2013，21（8）：1873-1879.

[4] 黄晓明，陈翔，贾振宇.人工microRNAs在肿瘤基因医治中的研讨[J].我国细胞生物学学报，2013，35（7）：1018-1026.

[5] Guan H， Wei G， Wu J， et al. Down-regulation of miR-218–2 and its host gene SLIT3 cooperate to promote invasion and progression of thyroid cancer[J].Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism， 2013，89（5）：2346-2352.

[6] Davis BN， Hata A microRNA in cancer—the involvement of aberrant microRNA biogenesis regulatory pathways[J].Genes Cancer，2010（11）：1100-1114.

[7] Hassan MQ， Maeda Y， Taipaleenmaki H， et al. miR-218 Directs a Wnt signaling circuit to promote differentiation of osteoblasts and osteomimicry of metastatic cancer cells[J].Journal of Biological Chemistry，2012，287（50）：84-92.

[8] Gien LT， Beauchemin MC， Thomas G. Adenocarcinoma： a unique cervical cancer[J].Gynecol Oncol，2010，116：140-146

[9] Li Q， Zhu F， Chen P. miR-7 and miR-218 epigenetically control tumor suppressor genes RASSF1A and Claudin-6 by targeting HoxB3 in breast cancer[J].Biochemical and Biophysical Research Communications，2012， 424（1）：28-33.

（收稿日期：2014-01-05）