兔耳瘢痕 缬沙坦对兔耳增生性瘢痕的影响

陈晶　秦嵘嵘　陈少健

[摘要]意图 研讨缬沙坦对兔耳增生性瘢痕构成的影响。办法16只新西兰兔随机分为4组，每只兔耳腹侧制造6个创面。高剂量医治组：术后第21天开端给予缬沙坦8mg/（kg·d）口服医治。低剂量医治组：在术后第21天开端予缬沙坦4mg/（kg·d）口服医治。阳性对照组：别离在术后第21天和28地利给予皮损内曲安奈德打针医治。阴性对照组：不给于任何干涉。在术后第42地利处死一切兔子，搜集一切标本行苏木素-伊红染色和苦味酸天狼星红染色。成果高剂量医治组的瘢痕增生指数（1.71±0.11）、成纤维细胞数量（438.15±50.01）、I型胶原百分比（41.94±2.29）、Ⅲ型胶原百分比（28.83±1.48）均低于阴性对照组（2.02±0.29），（612.08±106.59），（49.51±2.81），（29.80±1.39）；低剂量医治组的I型及Ⅲ型胶原百分比（48.24±2.02），（29.05±1.10）均低于阴性对照组；阳性对照组的瘢痕增生指数（1.33±0.13）、成纤维细胞数量（233.08±62.32）、I型及Ⅲ型胶原百分比（36.42±2.41），（27.94±2.26）均低于高剂量医治组。定论缬沙坦能够在必定程度上按捺兔耳瘢痕增生，高剂量医治作用更佳。

[关键词]缬沙坦；曲安奈德；增生性瘢痕；兔耳瘢痕模型

皮肤病理性瘢痕包含增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，其构成及开展与遗传、医治等许多方面有着亲近的联络，但首要的特征为成纤维细胞的过度增生和胶原蛋白代偿失调导致的反常堆积。因为其病因尚不清楚，现在临床上常运用的医治办法（手术、药物、机械压榨、放射等）都无法彻底令人满意。因而，其发病机制及医治靶点的研讨热度经久不衰。肾素一血管严重素体系在各脏器纤维化过程中发挥重要作用，经过细胞培养研讨，人们发现血管严重素Ⅱ的1型受体（ATlR）拈抗剂氯沙坦能够按捺人增生性瘢痕成纤维细胞的成长增殖及纤维链接蛋白的组成，提示ATlR拮抗剂或许对增生性瘢痕有防治作用。本研讨经过动物试验进一步调查ATlR拮抗剂（缬沙坦）对增生性瘢痕的影响。

1.资料与办法

1.1资料

动物：16只新西兰兔（雌性，2000～2500g，清洁级，分笼养殖），购自广东省医学试验动物中心，养殖于汕头大学医学院试验动物中心，适应性养殖1周后运用。试验设计已经过汕头大学医学院动物试验道德检查。仪器：Leica DMRXA2万能显微镜（德国Leica公司），Leica RM2235手动转轮切片机（德国Leica公司），CS-VI型摊片、烤片机（孝感市宏业医用仪器有限公司），Leica IM50图画收集体系（德国Leica公司），图画剖析体系为Image-ProPlus（Media Cybernetics L.P.），偏振光显微镜（DMR显微镜，Leica）。药物：缬沙坦胶囊（北京诺华制药.有限公司），曲安奈得打针液（上海通用药业股份有限公司）。

1.2办法

运用戊巴比妥钠（1.5mg/kg）静脉麻醉新西兰兔，将兔耳腹侧展平后丈量、描绘直径1cm圆形手术区域，每个手术区域距离约1cm。运用10号手术刀片切开全层皮肤及软骨膜达软骨，蚊式血管钳沿创缘当心剥离全层皮肤及软骨膜。每只兔耳制备6个圆形残缺面，共192处，术后創面露出，待其自行愈合。

1.3动物分组

依照随机数余数分组法分为4组，每组4只。高剂量医治组：术后第21天开端予缬沙坦8mg/（kg·d）混悬液（溶剂为灭菌打针用水）灌胃，每天1次；低剂量医治组：术后第21天开端予缬沙坦4mg/（kg·d）混悬液（溶剂为灭菌打针用水）灌胃，每天1次；阳性对照组：术后第21天和28天别离进行曲安奈德溶液0.1mL皮损内打针；阴性对照组：不给于任何干涉。

1.4选材及标本制造

术后第42天，运用戊巴比妥钠（1.5mg/kg）静脉麻醉新西兰兔，切取一切创面标本（直径约1.2cm，圆形），每个标本沿正中线均匀分为2份。标本置于10%甲醛溶液中固定、乙醇脱水、白腊包埋、切片（厚度5um）后，进行HE染色和苦昧酸天狼星红染色。

1.5调查目标

（1）大体调查：术后第42天摄影记载创面状况，调查瘢痕的高度、色彩、质地。镜下调查：胶原纤维的摆放、形状。（2）瘢痕增生指数，用测微尺丈量兔耳瘢痕最高点至耳软骨外表的笔直厚度（a）、瘢痕周边正常皮肤至耳软骨外表的笔直厚度（b），核算得出瘢痕增生指数（HI=a/b）。（3）成纤维细胞数量：经苏木精一伊红染色制成瘢痕安排切片，按Weidner计数办法在400倍视界光镜下随机计数3个视界的成纤维细胞数量，每个视界由2位医师一起计数，求其均匀值。（4）I、Ⅲ型胶原百分比：苦味酸天狼星红染色切片，在100倍偏振光显微镜下每张切片随机计数3个视界，选用Image-ProPlus6.0图画剖析体系别离进行检测。I型胶原百分比=（赤色区域面积+黄色区域面积）/总面积×100%；Ⅲ型胶原百分比=绿色区域面积/总面积×100%。

1.6统计学剖析

选用SPSS16.0统计学软件进行统计剖析，数据用（x±s）标明，契合正态分布和方差齐性的数据，多组间比较选用单要素方差剖析，组间两两比较选用LSD查验；不契合正态分布或方差齐性的数据，多组间比较选用Kruskal-Wallis H查验，P<0.05标明具有统计学差异。

2.成果

2.1大体调查

阳性对照组：瘢痕平整，色彩最浅，质地最软。高剂量医治组：瘢痕较平，色彩略红，质地较软。低剂量医治组和阴性对照组：瘢痕显着拱起，色彩较深，质地坚固。

2.2镜下调查

阳性对照组：胶原纤维摆放规整，形状纤细。高剂量医治组：胶原纤维摆放欠规整，形状较纤细。低剂量医治组：胶原纤维摆放紊乱，形状较粗。阴性对照组：胶原纤维摆放紊乱，形状粗大。

2.3试验成果

（1）瘢痕增生指数。多组间比较差异有统计学含义。组间两两比较：高剂量医治组、阳性对照组别离与阴性对照组比较有统计学差异。低剂量医治组与阴性对照组比较无统计学差异（P=0.15）。（2）成纤维细胞数量。多组间比较差异有统计学含义。组间两两比较：高剂量医治组、阳性对照组别离与阴性对照组比较有统计学差异。低剂量医治组与阴性对照组比较无统计学差异（P=0.22）。（3）I型胶原百分比（%）。多组间比较差异有统计学含义。组间两两比较：高剂量医治组、低剂量医治组、阳性对照组别离与阴性对照组较有统计学差异。（4）Ⅲ型胶原百分比（%）。多组间比较差异有统计学含义。组间两两比较：高剂量医治组别离与阳性对照组、阴性对照组比较有统计学差异；高劑量医治组与低剂量医治组比较无统计学差异（P=0.50）；低剂量医治组别离与阳性对照组、阴性对照组比较有统计学差异（P<0.05）。见表1。

3.评论

增生性瘢痕是由物理、机械、化学、生物等要素引起皮肤安排损害后，愈合功用失调的临床表现，其构成及开展与遗传、感染、解剖部位等许多要素有关，与之相关的挛缩、变形、灼热感、瘙痒感、毁容等能够讳饰手术的成功，并成为患者和医师一起重视的问题。现在研讨将其发病机制概括为成纤维细胞的过度增殖和细胞外基质的过度发作和堆积。成纤维细胞是伤口愈合时的首要修正细胞，在病理状态下，成纤维细胞增殖旺盛并分泌很多细胞外基质。细胞外基质中含量最多的是I、Ⅲ型胶原，I型胶原较为粗大在皮肤中首要起支撑作用，而Ⅲ型胶原包绕着I型胶原起到衔接和物质交流等作用，正常瘢痕安排以I型胶原添加为主，在增生性瘢痕中I、Ⅲ型胶原均显着添加。兔耳瘢痕模型制取便利易行，且在增生性瘢痕构成过程中胶原的含量及份额与人增生性瘢痕极为类似，是研讨瘢痕中胶原表达改变较为抱负的动物模型。现在，增生性瘢痕的医治办法很多，但都无法到达令人满意的医治作用，在断定其他医治办法的作用时，皮损内类固醇打针医治被作为规范。

肾素-血管严重素体系的首要活性成分是血管严重素Ⅱ，在促进心脏、肾脏、肝脏等器官的纤维化过程中发挥重要作用。皮肤安排具有独立组成血管严重素Ⅱ的才能；在增生活泼的增生性瘢痕安排中血管严重素Ⅱ表达添加，并经过血管严重素Ⅱ的1型受体（ATlR）和2型受体（AT2R）及其下流信号通路来发挥病理生理作用，影响ATlR能够促进皮肤成纤维细胞增殖及组成I型胶原纤维和转化成长因子B1，影响AT2R促进皮肤成纤维细胞凋亡，并按捺胶原组成，促进胶原降解。缬沙坦是选择性ATlR受体阻滞剂，经过肝纤维化的研讨发现，其可下调Bcl-2表达，按捺肝星状细胞活化；并可下调I型胶原及转化成长因子B1的表达，发挥抗纤维化的作用。与其他ATlR受体阻滞剂比较，缬沙坦几乎不经过代谢，以原形分泌，临床没有发现相关药物在诱导或按捺细胞色素P450体系方面与之发作相互影响。

咱们的研讨发现，在伤口构成后口服高剂量缬沙坦，对兔耳增生性瘢痕的瘢痕增生指数、成纤维细胞数量、I和Ⅲ型胶原百分比均有较显着按捺造用，阐明缬沙坦具有按捺兔耳瘢痕增生的作用。低剂量医治组的I和Ⅲ型胶原百分比虽有下降，但对大体形状的影响并不明显，标明缬沙坦对兔耳增生性瘢痕的按捺造用或许存在剂量依赖性。关于糖尿病肾病的临床研讨标明，双倍剂量的缬沙坦能够明显按捺或反转间质纤维化、进步作用、削减复发，并且不良反应无显着添加。以上成果提示咱们，运用缬沙坦医治增生性瘢痕时应运用高剂量，而添加药物剂量后的医治危险需进一步研讨和评价。此外，口服缬沙坦对增生性瘢痕的按捺造用不及皮损内糖皮质激素打针医治，并且无法使瘢痕彻底衰退，在医治增生性瘢痕时仍无法取得抱负作用，存在必定局限性。但在糖皮质激素运用忌讳时，能够考虑口服缬沙坦作为代替医治。

综上所述，高剂量缬沙坦经过按捺成纤维细胞增殖及I和Ⅲ型胶原堆积，能够在必定程度上按捺兔耳瘢痕增生，可是其详细机制、药效剂量联系及联合用药作用有待进一步研讨。