超高效液相色谱质谱 高效液相色谱—质谱联用技能在中药研讨中的使用发展

韦建乔　韦波

[摘要]高效液相色谱一质谱联用（LC-MS）将高效液相色谱的高别离效能与质谱的强壮结构测定功用组合起来，不只完成对杂乱混合物更精确的定量和定性剖析，而且简化了样品的前处理进程，样品剖析更简洁，为中药组分的剖析及结构的判定供给了一个重要和全新的技能支撑。该技能对中药化学成分的剖析及判定，中药指纹图谱的研讨，中药药代动力学的研讨有运用价值。论说了高效液相色谱-质谱联用（LC-MS）在中药范畴的运用开展，论说了各办法的特色、运用规模及研讨现状，旨在为中药研讨者进步参阅依据。促进中药研讨向现代化的开展。

[关键词]高效液相色谱质谱联用；中药；指纹图谱；药代动力学

[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]2095-0616（2016）05-44-03

作为一种新的现代技能剖析手法，高效液相色谱-质谱（LC-MS）联用技能在别离效能、灵敏度和专特色等方面都有着巨大的优势，展现出强壮的定性、定量剖析才能，从而在药物剖析特别是中药剖析得到广泛的运用。本文就近年来HPLC-MS联用技能在中药成分剖析及结构的判定、中药指纹图谱研讨、中药药代动力学研讨3个方面的运用作一论说。

1高效液相色谱-质谱（LC-MS）联用技能有独特的优势和特色

当用传统的高效液相色谱（HPLC）测定样品时，样品中的杂质对主成分有较大的搅扰，主峰不易别离，峰型也欠好，精确性有影响但却找不到好的办法时，高效液相色谱一质谱（LC-MS）能够扫除其他杂质的搅扰，即便主成分在色谱上没有彻底别脱离，但经过MS的特征离子质量色谱图也能给出它的色谱图来进行定性定量。选用高效液相色谱-质谱（LC-MS）剖析时其活动相主份相对于传统高效液相色谱（HPLC）法更少更简略，色谱柱更短更小（常用标准是2.1mm×50mm，1.8μm），出峰时刻大大缩短，却能够得到很好的别离效果，短时刻内可完成对一个样品的剖析，操作简略、重复性好。更适合于大批量样品的测定。高效液相色谱一质谱（LC-MS）还能够用相对简略的色谱条件对中药中多种成分的定性、定量剖析，比方剖析西青果中的诃子酸、诃黎勒酸、鞣云实精、原诃子酸等化合物，办法简洁，剖析时刻短。而用传统的高效液相色谱法（HPLC）测守时不只要用到不同的色谱条件，且洗脱、别离效果往往欠好，剖析时刻也很绵长。

2液质联用技能在中药研讨中运用开展

2.1在中药成分剖析以及中药结构判定中的运用

中药的成分多而杂乱，且传统的别离判定办法（提取一别离一结构判定）耗时、耗力、重复性强，技能难度也较大。因而，其化学成分的检测成为中药研讨中首要处理的问题。而LC-MS将LC的高别离效能与MS的测定功用组合起来，不只能够对杂乱混合物进行定性和定量剖析，而且对样品的前处理要求不是很高，为中药组分剖析、结构判定等，供给了一个全新的技能支撑。

白雪等选用液相色谱-离子阱-飞翔时刻质谱（LCMC-IT-TOF）对金银花中的化学成分进行快速精确地定性剖析，得到高分辩、高精度的一级、二级质谱数据，结合高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-DAD）数据剖析以及Formula Predictor分子式猜测，判定了金银花中的17种化学成分，包含6个有机酸类成分，3个黄酮类成分和8个环烯醚萜成分。孙冬梅等运用超高效液相色谱一四级杆-飞翔时刻质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）测定银杏磷脂软胶囊甲醇提取物中化学成分，在优化的液质联用条件下，经过对照品、数据库匹配及文献数据，判定为槲皮素（quercetin）、芹菜素（apigenin）、山柰酚（kaempferol）、槲皮素-3-0-[2-0-（β-D-葡萄糖基）]-α-L-鼠李糖苷（quercetin 3-0-[2-0-（B-D-glucosyl）-α-L-rhamnoside]）等12种黄酮类成分。谭银丰等运用液相色谱-质谱联用仪（LC-MS/MS），在电喷雾离子源正离子形式下（ESI+），选用多反响监测形式（MRM）对或许的化合物进行针对性剖析。成果在高良姜叶的甲醇提取液中共判定出分归于两类成分的16个化合物，其间黄酮类物质白杨素、乔松素、杨芽黄素、芹菜素、高良姜素、高良姜素-3-0-甲醚、金合欢素、山柰酚、山柰素、槲皮素、异鼠李素、芦丁。二芳基庚烷类成分包含益智酮甲、益智醇、六氢姜黄素和hannokinol。王乐奇等选用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技能（LC-ESI-MS）对钩藤药材的乙醇提取物的化学成分进行剖析判定，成果共别离判定出6个化学成分，首要为生物碱类成分，别离为：钩藤碱、乌索酸、异钩藤碱、柯诺辛碱B和二氢柯楠因碱。

2.2在中药指纹图谱研讨的运用

指纹图谱是一种归纳的，可量化的判定手法，它是树立在中药化学成分系统研讨的基础上，首要用于点评中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。其首要特色表现在“全体性”“含糊性”。中药成分杂乱，含杂质多，别离提纯难度大。研讨标明，中药的药效是多成分一起效果的成果，不或许是某几个首要成分或许目标成分在起效果，中药指纹图谱技能现已逐渐成为技能检测中成药特别是中药材质量的有用手法。液质联用技能在对不知道成分的研讨中，其原理就是由串联质谱得到的特征碎片离子等结构信息，结合已知结构化合物的裂解等规则，来对不知道成分进行定性、定量剖析整好满意中药指纹图谱研讨的需求。

曹树萍等选用超高液相色谱（UPLC）技能树立参麦注射液的指纹图谱快速检测办法，并使用离子阱质谱联用技能对其特征性成分进行剖析，成果树立了全国3个厂家19批参麦注射液UPLC谱指纹图谱，使用多级质谱信息，结合对照品和文献对12个共有峰进行指认。19批参麦注射液除2批外类似度均高于0.85。聚类剖析成果显现不同厂家的参麦注射液各自聚为一类。汪祺等选用超高效液相色谱树立生脉注射液指纹图谱，并运用超高效液相色谱一离子阱质谱联用技能对首要色谱峰进行指认，标定了18个共有峰，8个出产企业的类似度除2个企业外均高于0.9；使用二级质谱信息，结合对照品及文献报导，断定18个共有峰化合物的或许结构。超高效液相指纹图谱可快速有用地点评生脉注射液的产品质量。韦英杰等用高效液相色谱办法（带有二极管阵列检测器），以川续断皂苷Ⅵ为参照物树立续断色谱指纹。选用高效液相色谱-质谱（LC-MS）联用技能初次剖析其间化学成分的质谱特征。最终断定了续断药材的17个共有峰，因为该办法（指纹图谱）具有较高的精密度，较好的稳定性和重复性，对续断药材的质量点评具有很大含义。高效液相色谱一质谱（LC-MS）联用技能判定了该药材中30多个化合物的相对分子量，经过多种办法对照，对其间10个具有特征的成分进行了估测，并承认。并用高效液相色谱-质谱（LC-MS）联用技能对续断指纹图谱中的特征峰进行结构承认，可使其色谱指纹图谱的特征性更强，对续断药材的质量操控得到一个很大的进步。

2.3中药药代动力学研讨中的运用

药物代谢动力学（Pharmacokinetic）是定量研讨药物在生物体内吸收、散布、代谢和分泌规则，并运用数学原理和办法论说血药浓度随时刻改变的规则。LC-MS技能因为其具有快速、微量、专属、精确的特色，除了可断定分子量之外，还能够依据特异性开裂规则推导出重要部分结构乃至是完好的结构。因而，LC-MS技能已成为药物代谢研讨中不能代替的一种强有力的别离剖析东西。

皮子凤等选用依据超高效液相色谱与串联四级杆飞翔时刻质谱仪（UPLC/Q-TOF-MS）联用技能的代谢组学办法，进行了五味子医治糖尿病肾病大鼠血清代谢组学研讨。共判定了7种内源性代谢产品，别离为黄尿酸、油酰胺、棕榈酰胺、尿素、5-羟基己酸、硫酸对甲酚和对甲酚葡萄糖苷酸，阐明五味子经过影响色氨酸代谢、嘌呤代谢、脂肪酸代谢、肠内菌代谢等通路发挥医治效果，其间嘌呤代谢、肠内菌代谢通路是其削减肾病损害的重要效果途径。从五味子全体效果视点开始阐明晰其医治糖尿病肾病的效果机制。

秦春雨等树立大鼠血浆中雷公藤内酯醇的超高效液相色谱质谱联用（UPLC-MS/MS）法测定大鼠灌胃给药与静脉注射给药后的血浆药物浓度，并进行药代动力学参数点评。Sprague Dawley大鼠别离经灌胃与尾静脉注射给药，经颈静脉取血，测定不同时刻的大鼠血浆药物浓度，并核算其首要药代动力学参数。成果在0.1～200.0ng/mL质量浓度规模内，血浆雷公藤内酯醇线性关系杰出，血浆中雷公藤内酯醇的定量限为0.1g/ml，该药稳定性杰出，回收率均在95%以上，日内与日间差异均小于15%。口服与静脉给药后，雷公藤内酯醇在大鼠体内的消除均较快，口服生物使费用为9.5%。本研讨成果为雷公藤内酯醇的结构优化、剂型改善以及临床运用供给了试验依据。

辛杨等选用液-液萃取法对灌胃给予次乌头碱的大鼠尿液样品进行纯化，使用高效液相色谱一离子阱串联质谱检测纯化样品，依据各保存时刻对应化合物的多级串联质谱数据，并与文献对照，揣度次乌头碱在大鼠尿液中代谢产品的结构。成果与空白组大鼠尿液比较，在次乌头碱给药大鼠的尿液中共检测到4个乌头类生物碱，别离为次乌头碱原型化合物，18-0-去甲基次乌头碱，N-去甲基次乌头碱，被标识为羟基化的代谢物。研讨标明次乌头碱在大鼠体内或许发生了去甲基、羟基化代谢反响，为该成分的药效效果研讨供给参阅。

3小结

综上所述高效液相色谱-质谱（LC-MS）联用技能以其高别离才能、高灵敏度以及高选择性，而且运用规模广，具有强的专特色等特色，对传统中药的研讨会是一个很大的打破，在中医药现代化研讨中得到越来越广泛的运用。此外，高效液相色谱-质谱（LC-MS）联用技能不管在药物的剖析、挑选方面，仍是在农药残留、环境安全以及食物剖析等方面也得到了广泛的运用。跟着技能的更新开展，信任高效液相色谱一质谱（LC-MS）联用技能在中医药范畴发挥着巨大的效果和夸姣的运用远景。