鼻咽癌复发预兆：LASS2、Ki67表达与鼻咽癌复发的相关性及其含义

王见璋++何志明　黄金凤　李炜霞

[摘要]意图 评论LASS2及Ki67表达与鼻咽癌复发的相关性及其含义。办法 搜集我院2011年～2014年的126例鼻咽癌活检标本，其间首发病例77例，复发病例49例。选用免疫組织化学办法检测LASS2及Ki67在126例鼻咽癌活检安排中的表达，剖析LASS2及Ki67在两组间的表达差异及其之间的相关性。成果 LASS2在复发病例中的阳性率为61.2%，低于首发病例的88.3%，差异有统计学含义（P<0.001）。Ki67与鼻咽癌复发无显着相关性（P>0.05），但LASS2表达与Ki67表达相比较，差异有统计学含义（P<0.05）。定论 LASS2在鼻咽癌复发的病例中呈低表达，检测LASS2蛋白可能有助于提示肿瘤是否简单复发，LASS2在猜测鼻咽癌复发中可能具有重要的临床含义。LASS2与Ki67存在负相关，提示LASS2有可能按捺鼻咽癌肿瘤细胞的增殖。

[关键词]鼻咽癌；LASS2；Ki67；复发

[中图分类号] R739.62 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）10（c）-0120-03

Relationship between the expression of LASS2 and Ki67 with recurrent of nasopharyngeal carcinoma and its significance

WANG Jian-zhang HE Zhi-ming HUANG Jin-fen LI Wei-xia

Department of Pathology，Shunde Hospital of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Province，Foshan 528333，China

[Abstract]Objective To investigate the relationship between LASS2 and Ki67 expression with the recurrent of nasopharyngeal carcinoma （NPC） and its significance.Methods A total of 126 cases of NPC biopsy specimens in our hospital from 2011 to 2014 were collected，including 77 initial cases and 49 recurrent cases.Immunohistochemical methods were used to detect the expression of LASS2 protein and Ki67 in 126 patients with NPC.The difference between the expression of LASS2 and Ki67 in the two groups and their correlation were analyzed.Results The positive rate of LASS2 in recurrent cases was 61.2%，which was lower than 88.3% of the initial cases，with significant difference （P<0.001）.Ki67 had no significant correlation with the recurrence of NPC （P>0.05），however，there is a negative correlation between LASS2 expression and Ki67 （P<0.05）.Conclusion LASS2 was low-expressed in the recurrence of NPC.Detection of LASS2 protein may help to prompt tumor recurrence.LASS2 may be a clinically significant biological indicator for predicting the recurrence of NPC.LASS2 is negatively correlated with Ki67.It is suggested that LASS2 may inhibit the proliferation of NPC tumor cells.

[Key words]Nasopharyngealcarcinoma；LASS2；Ki67；Recurrence

鼻咽癌是原发于鼻咽黏膜被覆上皮的恶性肿瘤，是我国常见的恶性肿瘤之一，发病率高，在广东、广西、福建、湖南等地多发。鼻咽癌起病藏匿，前期不易被发现，但简单呈现淋巴结搬运或远处搬运。鼻咽癌发病机制不明，医治效果不抱负，5年生存率约50%。放射医治是鼻咽癌最首要的医治手法，但首程放疗后仍有8.2%～22.0%的复发率[1]。复发鼻咽癌预后较差，其再程放疗的5年生存率为18.7%～36%[2]。鼻咽癌的发作与相关的基因变异有关，文献现已报导了多种基因变异促进了鼻咽癌的发作[3-7]，但现在尚缺少与鼻咽癌复发相关的基因研讨。

LASS2是一种抑癌基因，广泛存在于人体的多种安排中[8]，近年来的研讨证明其可能成为一种肿瘤标志物，具有广泛的发展前景。Ki67是一类与细胞周期相关的增殖细胞核抗原，临床研讨显现，Ki67与肿瘤的增殖及预后有亲近的联系。本文经过检测LASS2蛋白及Ki67在鼻咽癌首发及复发病例中的表达状况，剖析LASS2及Ki67在鼻咽癌复发中的效果以及两者之间的相关性，旨在评论其作为评价鼻咽癌复发目标的可能性。endprint

1材料与办法

1.1病例标本

搜集2011年～2014年我院的126例鼻咽癌活检标本，其间首发病例77例，复发病例49例；男性94例，女人32例；年齡20～78岁，均匀（49.67±11.22）岁。归入标准：①首发病例活检前均未进行任何鼻咽癌相关医治；②复发病例复发前均进行标准化医治，并随访2年以上。

1.2试剂

LASS2多克隆抗体购于美国Santa Cruz公司（按1∶100稀释）；Ki67浓缩型鼠抗人单克隆抗体（按1∶1000稀释）及SP通用型免疫组化试剂盒均购于福州迈新公司。

1.3办法

标本经惯例处理后，制作成蜡块。选用免疫组化SP法检测标本中LASS2及Ki67表达的状况，具体操作如下。①安排白腊切片脱蜡，水化；②自来水冲刷后，以柠檬酸浸泡进行抗原修正，40℃微波修正15 min；③PBS冲刷3次，每次3 min（3×3 min）；④滴加3%双氧水于切片上，室温下孵育10 min，以阻断内源性过氧化物酶；⑤PBS冲刷（3×3 min）；滴加一抗，室温下孵育60 min或4℃过夜；⑥PBS冲刷（3×3 min）；⑦滴加二抗，室温下孵育15 min；⑧PBS冲刷（3×3 min）；⑨除掉PBS，滴加新鲜制造的DAB显色剂显色，约1 min；⑩自来水冲刷停止显色，苏木精复染、在1%盐酸乙醇分解，PBS返蓝，梯度乙醇脱水、二甲苯通明、中性树胶封片。LASS2成果判读标准参照文献[9]，以鼻咽癌肿瘤细胞胞质及（或）胞核呈现棕黄色颗粒为阳性，30%以上的肿瘤细胞上色才视为阳性。Ki67成果以鼻咽癌肿瘤细胞核呈现棕黄色颗粒为阳性，核算阳性细胞所占的份额，按份额区分三个等级，<10%为1级，10～30%为2级，>30%为3级。免疫组化染色时一切标本均有建立阳性对照和阴性对照。免疫组化染色成果由2～3位有经历的临床病理医生独立阅片判别。

1.4统计学办法

选用SPSS 19.0统计学软件对数据进行剖析，计数材料选用χ2查验，等级材料选用秩和查验，以P<0.05为差异有统计学含义。

2成果

2.1 LASS2蛋白在鼻咽癌中表达比较

77例首发病例中，LASS2阳性68例，阴性9例，阳性率为88.3%；49例复发病例中，LASS2阳性30例，阴性19例，阳性率为61.2%。复发病例组的LASS2蛋白表达阳性率低于首发病例组，差异有统计学含义（χ2=12.712，P=0.000）（表1）。

2.2 Ki67与鼻咽癌复发的相关性剖析

Spearman相关性剖析成果显现，Ki67与鼻咽癌的复发无显着相关性（r=0.086，P=0.341）（表2）。

2.3 LASS2蛋白表达与Ki67的相关性剖析

Spearman相关性剖析成果显现，LASS2蛋白表达与增殖指数Ki67呈负相关，差异有统计学含义（r=-0.208，P<0.05）（表3）。

3评论

鼻咽癌是发病率最高的头颈部恶性肿瘤，医治效果欠佳，复发率高。即便经过合理及标准的归纳医治，部分患者仍难以避免地呈现肿瘤复发。临床材料显现，经过标准化的归纳及放射医治后，仍有10%～36%的鼻咽癌患者会呈现鼻咽部分复发，其间半数以上发作在医治后的前3年内[10]。现在，对鼻咽癌复发机制的研讨相对缺少，因而，临床工作中尚缺少有含义的生物学目标猜测鼻咽癌的复发。

LASS2基因是近年来研讨的一种人类新的基因，归于肿瘤按捺基因。LASS2基因编码的蛋白参加细胞凋亡信号通路的调控。该蛋白经过结构相似性的原理，经过结合V-ATPase质子泵的亚基ATP6L，发挥按捺V-ATPase质子泵跨膜转运H+功用的效果，使细胞内H+浓度升高，进而激活线粒体凋亡通路，诱导细胞凋亡，然后到达按捺肿瘤细胞成长的效果[11-12]。此外，因为按捺了V-ATPase质子泵跨膜转运H+的功用，导致细胞外H+浓度下降，使得对H+高度灵敏的蛋白水解酶类的活性被按捺，引起细胞外基质（ECM）降解削减，然后按捺肿瘤的侵袭和搬运。

本研讨成果显现，LASS2蛋白在鼻咽癌复发病例中的表达阳性率显着低于首发病例组，提示LASS2蛋白表达阴性的鼻咽癌患者因失去了LASS2蛋白对肿瘤细胞成长的调控效果，然后更简单复发。

Ki67是临床病理查看中常用的抗体，与PCNA相同，首要用于判别细胞的增殖活性。该蛋白开始被发现确定为鼠源的核单克隆抗体，是1983年Gerdes等[13]用鼠源单克隆抗体检测一种来自霍奇金淋巴瘤系细胞核抗原时初次发现。Ki67表达在一切活动的细胞周期（G1、S、G2和有丝分裂期）中，而在G0期不表达。临床材料显现，Ki67增殖指数凹凸与许多肿瘤的分解程度、滋润搬运以及预后亲近相关，因而，也是恶性肿瘤预后的重要参阅目标之一[14-15]。

本研讨成果显现，Ki67与鼻咽癌复发无显着相关性，提示鼻咽癌复发好像与肿瘤细胞增殖活性无显着联系，但Ki67与LASS2蛋白之间存在负相关，这可能与LASS2抑癌基因的效果有关。LASS2经过诱导细胞凋亡然后按捺肿瘤细胞的成长，因而LASS2阳性的肿瘤细胞增殖指数相对较低。

综上所述，LASS2蛋白参加了对肿瘤细胞凋亡的调控，可以按捺肿瘤细胞的增殖，然后按捺肿瘤的复发，因而，检测LASS2蛋白可能有助于提示肿瘤是否简单复发，LASS2在猜测鼻咽癌复发中可能具有重要的临床含义。

[参阅文献]

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（收稿日期：2017-08-01 本文修改：祁海文）endprint