胃肠胰神经内排泄肿瘤：IMP3、Ki—67在胃肠胰神经排泄肿瘤中的表达及与临床病理特征的联系

李有恒++徐洪++曾+训

[摘要]意图 评论IMP3、Ki-67在胃肠胰神经排泄肿瘤（GEP-NEN）中的表达及与临床病理特征的联系。办法 搜集我院及周边地区自2010年1月～2016年10月确诊的59例GEP-NEN，运用免疫安排化学办法检测患者标本中的IMP3、Ki-67表达状况，结合临床病理特征，使用统计学的办法对成果进行剖析。成果 IMP3在GEP-NEN中阳性率为81.36%（48/59），在不同肿瘤直径、有无淋巴结搬运、不同肿瘤分期与分级中的表达差异有统计学含义（P<0.05），在是否有远处搬运中的表达差异没无统计学含义（P>0.05）；Ki-67在GEP-NEN中阳性率为44.68%（26/59），在肿瘤巨细、有无淋巴结搬运、有无远处搬运、病理分级及临床分期中的表达差异均有统计学含义（P<0.01）；IMP3、Ki-67表达跟着肿瘤体积越大、淋巴结搬运、病理分级越高、临床分期越晚阳性率越高。定论 IMP3与Ki-67在GEP-NEN的表达可作为判别患者预后的参阅要素之一；IMP3可能在GEP-NEN的发作、开展过程中起重要效果。

[关键词]神经内排泄肿瘤；胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白3；细胞增殖核抗原

[中图分类号] R735 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）02（c）-0015-04

Expression of IMP3 and Ki-67 in gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasm and its relationship with clinicopathological features

LI You-heng XU Hong▲ ZENG Xun

Department of Pathology，Shekou People′s Hospital of Shenzhen City in Guangdong Province，Shenzhen 518067，China

[Abstract] Objective To investigate the expression of IMP3 and Ki-67 in gastrointestinalopancreatic neuroendocrine neoplasm （GEP-NEN） and its relationship with clinicopathological features.Methods 59 patients with GEP-NEN diagnosed from January 2010 to October 2016 in our hospital and other surrounding areas were collected. Immunohistochemistry was used to detect the expression of IMP3 and Ki-67 in patients′ specimens.Clinical and pathological features were combined，and the results were statistically analyzed.Results The positive rate of IMP3 in GEP-NEN was 81.36% （48/59）.The differences of the expression in different tumor size，whether there was lymph node metastasis or not，different tumor stages and classifications were statistically significant （P<0.05）.There was no statistical significance in the expression of tumor in terms of whether there was distant metastasis or not （P>0.05）.The positive rate of Ki-67 in GEP-NEN was 44.68% （26/59）.The differences of the expression in different tumor size，whether there was lymph node metastasis or not，whether there was distant metastasis or not，different pathological grades and clinical stages were statistically significant （P<0.01）；the positive rate of the expression of IMP3 and Ki-67 was increased with larger tumor size，lymph node metastasis，higher pathological grades，and more advanced clinical stages.Conclusion The expression of IMP3 and Ki-67 in GEP-NEN may be one of the reference factors for determining patients′ prognosis.IMP3 may play an important role in the development and progression of GEP-NEN.

[Key words]Neuroendocrine neoplasm；Insulin-like growth factor Ⅱ mRNA binding protein 3；Cell proliferating nuclear antigen神經内排泄肿瘤（neuroendocrine neoplasm，NEN）是起源于肽能神经元以及神经内排泄细胞的一组异质性恶性肿瘤，都有搬运潜能[1]。NEN可发作在人体多处器官和安排，首要发作在胃肠道和胰腺，胃肠胰神经内排泄肿瘤（gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasm，GEP-NEN）占一切NEN的55%～70%，发病率约为5.25/10万，在消化道肿瘤中排第2位[2]。近年来，GEP-NEN发病率显着升高，与30年前比较添加了将近5倍[3]。胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白3（insulin-like growth factorⅡ mRNA binding protein 3，IMP3）是一种新辨认的肿瘤胚胎蛋白，是影响肿瘤增殖及侵袭搬运的重要要素之一[4]；恶性肿瘤的发作、开展与肿瘤细胞增殖密切相关；细胞增殖核抗原（cell proliferating nuclear antigen）（Ki-67）是细胞增殖的杰出标志。现在，IMP3在GEP-NEN中的表达联系稀有研讨，国内未见报道，本研讨回忆性剖析59例GEP-NEN患者的临床病理材料，经过免疫安排化学办法检测IPM3、Ki-67水平，了解其与GEP-NEN临床病理特征的联系。

1材料与办法

1.1 一般材料

搜集广东广州、深圳及东莞等5家医院自2010年1月～2016年10月确诊的59例胃肠胰神经内排泄肿瘤，男性41例，女人18例，男女比例2.28∶1。年纪19～77岁，均匀47.9岁。发作在前肠19例，中肠14例，后肠8例，胰腺18例。肿瘤直径0.4～7 cm，其间直径≥2 cm共34例，<2 cm共25例。发作淋巴结搬运14例。发作远处搬运8例，其间4例肝搬运，2例肺搬运，皮肤及骨搬运各1例。按2010年《WHO消化系统肿瘤分类》的分级规范[5]，1级（G1）27例，2级（G2）14例，3级（G3）18例；G1、G2是NEN，归于高分解肿瘤，G3是神经内排泄癌（neuroendocrine carcinoma，NEC），归于低分解肿瘤。参照美国癌症联合委员会（American Joint Committe on Cancer，AJCC） 2010年第7版TNM分期规范[6]，Ⅰ期23例，Ⅱ期8例，Ⅲ期20例，Ⅳ期8例。

1.2 研讨办法

一切标本均用4%中性甲醛固定，惯例脱水，白腊包埋，以4 μm厚度切片，别离做HE和免疫安排化学（Immunohistochemistry，IHC）染色。鼠抗人IMP3单克隆抗体（作业浓度1∶100）购自武汉博士德公司；鼠抗人Ki-67单克隆抗体购自福州迈新生物有限公司，经过罗氏全主动免疫组化染色仪（BENCHMARK GX）完结免疫组化染色，参照该仪器操作流程：①4 μm厚白腊切片置于65℃烤片机中烤60 min，贴上标签置于机器切片盘上；②顺次放上DAB试剂盒、苏木精、返蓝液和一抗等试剂瓶，运转仪器；③机器主动完结消化、抗体孵育和复染；④用含有温文清洁剂的蒸馏水冲刷、乙醇脱水、二甲苯通明，最终中性树脂胶封固；⑤用已知阳性组作为阳性对照，用PBS替代一抗作为阴性对照。

1.3 成果判读

选用双盲法，一切病例均由两位高年资病理医生阅片。IPM3阳性定坐落细胞质，光镜下呈黄褐色（图1），以>10%的肿瘤细胞胞质上色定为阳性，按上色强度分弱阳性、中阳性及强阳性，相应显现为浅黄色、棕黄色及棕褐色。Ki-67阳性定坐落细胞核，光镜下呈黄褐颗粒状（图2），以>5%的肿瘤细胞核上色定为阳性，以阳性肿瘤细胞数占比≥50%定为高增殖活性。

1.4 统计学办法

一切数据选用SPSS 19.0统计学软件处理，各组计数材料比较选用χ2查验，以P<0.05为差异有统计学含义。

2成果

IMP3阳性率为81.36%（48/59），强阳性5例，中阳性27例，弱阳性16例；IMP3在肿瘤巨细、淋巴结搬运、病理分级及临床分期中的表达差异均有统计学含义（P<0.05），而在肿瘤是否有搬运的表达差异无统计学含义（P>0.05）。Ki-67阳性率为44.68%（26/59），高增殖活性12例；Ki-67在肿瘤巨细、淋巴结搬运、远处搬运、病理分级及临床分期的表达差异均有统计学含义（P<0.01）（表1）。

3 评论

GEP-NEN是稀有的异质性肿瘤，可表现为相对慵懒、低度恶性到高度恶性[7]，有研讨显现，GEP-NEN发病率男性高于女人[3]，本研讨与此相符。近年发病率显着升高，与医疗确诊技能的前进有关，但实践发病率也是升高的[8]。

1907年，Oberndorfer发现胃肠道有一种相似癌的良性肿瘤，并命名为类癌[9]，这是人们对胃肠胰神经内排泄肿瘤的前期知道，后来证明这类肿瘤都是恶性的。跟着研讨的深化，发现其来源于消化道弥散神经内排泄系统，部分肿瘤能吸取胺前体及脱羟基（amine precursor uptake and decarboxylation， APUD），所以又名APUD瘤[10]。因为安排形状多样，生物学行为杂乱，长期以来，这类肿瘤的命名及分类较为紊乱，直到2000年世界卫生安排（WHO）才共同命名为神经内排泄肿瘤[11]，2010年《WHO消化系统肿瘤分类》第4版对胃肠胰神经内排泄肿瘤制订了分级、分期规范，同年得到我国胃肠胰神经内排泄肿瘤病理学确诊共同的共同引荐[12]。GEP-NEN分级、分期被证明是影响患者生存率的独立风险要素[13]，有报道称GEP-NENⅠ、Ⅱ期患者5年总生存率达100%，Ⅲ期为91%，Ⅳ期为73%[14]。

IMP3是胰島素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白宗族成员之一，在胚胎安排及人体多种恶性肿瘤中高表达，在瘤旁安排、良性肿瘤及成人正常安排中不表达或低表达，被认为是肿瘤胚胎蛋白[15]，很多研讨标明，IMP3与消化道鳞癌、腺癌、胆管癌、乳腺癌、膀胱癌等多种恶性肿瘤的侵袭和开展联系密切，被认为是影响肿瘤患者预后的一个关键要素[4]。基础研讨提醒IMP3经过结合信使RNA，促进方针RNA的翻译，上调胰岛素样生长因子Ⅱ水平，然后引起细胞增殖并按捺细胞凋亡，是促进肿瘤增殖的重要要素[16]。一起IMP3能够经过上调两性霉素诱导基因、白细胞活化黏附因子和基质金属蛋白酶1等的表达，促进肿瘤细胞伪足构成，进步肿瘤细胞的黏附效果，然后添加肿瘤侵袭性[17]。本研讨成果显现，IMP3在GEP-NEN中表达阳性率较高，且显着高于瘤旁正常安排，标明IMP3表达的上调可能在GEP-NEN的发作中起重要效果。一起IMP3在不同肿瘤直径、有无淋巴结搬运、不同肿瘤分期与分级中的表达差异有统计学含义，而且均成正相关，标明IMP3可能在GEP-NEN的恶性开展中也起到重要效果；本试验IMP3在是否有远处搬运中的表达差异无统计学含义，与部分研讨不太共同[18]，但发作远处搬运组阳性率为100.00%（8/8），高于无远处搬运组的78.41%（40/51），考虑可能与试验样本的局限性如病例的选择性偏移等有关，还有待进一步研讨。以上成果显现IMP3在GEP-NEN整体阳性率较高，与影响GEP-NEN患者预后的多个首要风险要素呈正相关。

Ki-67是一种与细胞增殖相关的核蛋白，只存在于细胞核内，自身的存在并不依赖于DNA和组蛋白，只表达于细胞周期的G1、S、G2及M期[19]，能较精确的反映细胞的增殖状况[20]，2010年《WHO消化系统肿瘤分类》第4版把Ki-67归入GEP-NEN的增殖活性分级目标之一。有报道称Ki-67能够评价GEP-NEN搬运潜能以及猜测患者的生存期[21]。本研讨显现Ki-67在肿瘤直径<2 cm、无淋巴结搬运、无远处搬运、分期较早、等级较低的肿瘤中表达阳性率较低，相反则阳性率均较高，组间差异有统计学含义，一起KI-67高增殖会集在高等级及分期晚的病例，标明Ki-67能较直观地显现肿瘤恶性程度，印证了Ki-67高表达，则肿瘤滋润和搬运的才能越强，临床分期越晚[19]。

综上所述，IMP3、Ki-67在GEP-NEN的表达均跟着肿瘤恶性程度的添加而上调，可作为判别患者预后的参阅要素之一；IMP3可能在GEP-NEN的发作、开展过程中起重要效果，跟着对IMP3效果机制的更深化研讨，可能为临床医治GEP-NEN带来新的手法。

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（收稿日期：2016-12-06 本文修改：许俊琴）