R-S细胞 胃癌细胞增殖中长链非编码RNAMEG3发生的详细影响剖析

刘婵　马东升　于林芳

[摘要] 意图 剖析长链非编码RNAMEG3在胃癌安排中的表达水平，并评论MEG3过表达对胃癌细胞增殖发作的详细影响。办法 将正常胃安排和细胞作为对照组，将胃癌安排和细胞的MEG3表达水平作为调查组，选用qRT-PCR（定量反转录PCR）技能对调查组的MEG3表达水平进行检测，运用转染pcDNA-MEG3将其上调，检测其转染率。然后将上调后MEG3水平对BGC-823和MGC-803细胞的增殖才能的影响选用MTT试验进行检测，并对两种细胞中的p53蛋白水平进行Western blot检测。成果 （1）用荧光定量PCR丈量36例胃癌安排及对应癌旁安排组正常安排中MEG3相对表达水均匀存在显着差异，具有统计学含义（P<0.05）。（2）MGC-803和BGC-823细胞经转染pcDNA-MEG3后，MEG3水平缓对照组比较，显着上升310和251倍，组间差异具有统计学含义（P<0.05）。（3）经MTT试验，MEG3水平上升后，MGC-803和BGC-823细胞的增殖才能显着下降（P<0.05）。（4）和对照组比较，MGC-803和BGC-823经转染pcDNA-MEG3后，其间p53的表达显着添加（P<0.05）。定论 胃癌安排和细胞中的MEG3下降能够按捺p53蛋白的激活，然后导致胃癌细胞增殖，影响胃癌的开展进程。

[关键词] 胃癌；细胞增殖；长链非编码RNA；MEG3；详细影响

[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2016）09-21-04

[Abstract] Objective To analyze the long non-coding RNA MEG3 expression levels in gastric cancer and explore MEG3 specific impact on gastric cancer cell proliferation by over-expression. Methods The normal gastric tissues and cells as the control group， the expression levels of gastric carcinoma cells and MEG3 as the observation group， using qRT-PCR（quantitative reverse transcription PCR） technique MEG3 expression levels in the observation group were detected using transfection pcDNA-MEG3 be raised， to detect the transfection efficiency. Then after impact MEG3 raise the level of proliferation of BGC-823 and MGC-803 cells using MTT assay testing， and by Western blot detection of two cells p53 protein levels. Results （1）measuring 36 cases of gastric cancer tissues and the corresponding normal tissues adjacent to cancer tissue groups in the presence of water on average relative expression MEG3 significant difference was statistically significant（P<0.05） with fluorescence quantitative PCR. （2）MGC-803 and BGC-823 cells were transfected with pcDNA-MEG3， compared with a significant increase in the level of the control group MEG3 310 and 251 times the difference between the groups was significantly（P<0.05）. （3）By MTT assay， after rising MEG3 level， proliferation MGC-803 and BGC-823 cells was significantly decreased（P<0.05）. （4）And the control group， MGC-803 and BGC-823 transfected pcDNA-MEG3， which significantly increased the expression of p53（P<0.05）. Conclusion The gastric cancer tissues and cells MEG3 decline can inhibit the activation of p53 protein， leading to gastric cancer cell proliferation and the development process of gastric cancer.

[Key words] Gastric cancer； Cell proliferation； Long chain non encoding RNA； MEG3；Specific effects

经全球相关统计数据显现，胃癌已经成为癌症逝世中的第二杀手，并且跟着人们饮食习惯的改变，该病的发作率正逐年上升[1-3]。因为胃癌前期并不具有典型的临床症状，故确诊人数有限，多以发展期的胃癌为主，并且大部分确诊患者会随同腹

腔内侵袭、搬运和淋巴结搬运，所以很难获得令人满意的临床医治效果，预后效果欠安，5年生存率缺乏1/10[4-6]。正因如此，把握胃癌的病理机制和分子水平的改变关于开展生物的确诊标志物具有重要含义，能够为胃癌的有用医治供给科学根据。长链非编码RNA具有许多生物学功用，并且在许多生物进程中具有重要效果。有研讨显现[7-8]，lncRNA的变异和调理功用反常是导致肿瘤的重要要素，所以断定与癌症亲近相关的lncRNA，对其生物和分子学效果进行研讨关于肿瘤的研讨具有重要含义。为了剖析长链非编码RNAMEG3在胃癌安排中的表达水平，并评论MEG3过表达对胃癌细胞增殖发作的详细影响，我院进行了如下研讨。

1 材料与办法

1.1 一般材料

选取我院在2008年4月～2012年12月期间收治的胃癌手术医治患者共36例，当选者均符世界胃癌确诊和分期规范，且术前未承受任何部分或全身医治。将36例胃癌手术患者归为调查组，组内男21例，女15例；年纪34～59岁，均匀（48.3±3.9）岁。选取另36例胃部健康人群归为对照组，组内男20例，女16例；年纪32～58岁，均匀（47.1±3.4）岁。两组研讨目标在性别、年纪等方面无显着差异（P>0.05），具有可比性。

病理安排样本搜集后马上行液氮冷冻，置于-80℃环境中保存待检。本次研讨经我院道德安排委员会同意，且患者均自愿签署《知情同意书》。置办专业的SGC7901、MGC-803和BGC-823胃癌细胞系以及正常胃黏膜上皮细胞系GES-1，在37℃以及5%二氧化碳的恒温箱中，上述细胞系均承受高糖DMEM、10%FBS、100U/mL青霉素和100mg/mL链霉素进行细菌培育，每24～48小时替换一次培育基，当细胞融合度到达80%～90%时开端传代培育。

1.2 研讨办法

1.2.1 提取RNA和qRT-PCR 将正常胃安排和细胞作为对照组，将胃癌安排和细胞的MEG3表达水平作为调查组，选用TRIzol试剂（福州晶康生物技能有限公司；产品规范：100mL；产品编号：RP1001）提取培育细胞中或安排中的总RNA，经过转录盒使其反转录为cRNA，并运用专门试剂（一步法快速PCR检测试剂盒，规范200×25μL，商品型号DDM0069A-25μL×200）进行实时PCR检测。检测成果选用GAPDH进行量化表达，记载MEG3以及GAPDH的上下游PCR引物。在ABI 7500平台上搜集数据和qRT-PCR成果，并选用规范办法对MEG3的表达进行核算。

1.2.2 构建和转染质粒 MEG3序列经组成和反克隆为pcDNA载体，经pcDNA-MEG3转染对MEG3的反常水平进行表达，并将空pcDNA载体作为对照，运用qPCR查验MEG3的表达水平。一切pcDNA-MEG3和空pcDNA载体均经专门试剂盒提取，严厉依照其阐明书进行操作，将其转染到6孔平板进行细胞培育，于2d后搜集细胞进行qRT-PCR和Western blot剖析，以及细胞增殖试验。

1.3 统计学处理

本次研讨数据选用SPSS19.0软件包进行统计剖析，对重要目标进行给出95%CI区间，并对其相关数据进行χ2或t查验，以P<0.05为差异有统计学含义。

2 成果

2.1 胃癌安排和癌旁安排中的MEG3水平

用荧光定量PCR丈量36例胃癌安排及对应癌旁安排组正常安排中MEG3相对表达水平，其间MEG3表达水平为（△CT=8.1542±1.571），显着低于癌旁正常安排中的表达水平（△CT=6.224±1.976），组间差异显着（t=4.5872，P=0.025<0.05）具有统计学含义。

2.2 体外试验外源性上调MEG3表达水平对胃癌细胞增殖的影响

MGC-803和BGC-823细胞经转染pcDNA-MEG3后，MEG3水平缓对照组比较，显着上升310和251倍，组间差异显着（t=2.036，P=0.002<0.05）。经MTT试验，MEG3水平上升后，MGC-803和BGC-823细胞的增殖才能显着下降（t=3.632，P=0.000<0.05）。

2.3 MEG3诱导p53蛋白激活

和对照组比较，MGC-803和BGC-823经转染pcDNA-MEG3后，其间p53的表达显着添加（t=1.945，P=0.004<0.05）。详细见图1。

3 评论

胃癌归于多要素和异质性的侵袭性疾病，是各种癌症患者中逝世率较高的一种疾病类型，已经成为全球范围内引起广泛重视的公共卫生问题。现在，胃癌很难彻底治好，且预后效果和确诊时胃癌的分期具有亲近相关，将癌安排彻底切除是现在医治胃癌的仅有有用办法[9-11]。

在胃癌患者的细胞水平表达中，前期患者和远期开展患者的一系列杂乱分子的反常将会对正常细胞的功用形成严重影响，在遗传和表观遗传学润饰的效果下，许多基因在正常细胞和受影响的细胞中的表达会存在显着的差异。因而，对这些的发作反常改变的分子进行研讨，关于深化了解癌细胞生物学的行为机制以及胃癌具有重要含义[12-14]。

近年来，跟着长链非编码RNA的研讨逐步深化，它的反常表达对胃癌发作以及开展机制的影响研讨也开端深化[15-16]。所以，本次研讨经过检测长链非编码 RNAMEG3在胃癌安排及细胞系中的表达水平，以及其过表达对胃癌细胞增殖才能的影响，以此来建立MEG3水平缓胃癌发作开展的联系，结合前人试验的MEG3对其他肿瘤细胞增殖的按捺机制，来估测其或许的在胃癌发作开展中的效果机制[17-19]。

在本次研讨中，相关于正常健康胃部安排而言，存在癌细胞的胃部安排及细胞中的MEG3水平显着更低，组间各细胞中的MEG3表达水均匀存在显着差异，具有统计学含义（P<0.05）。这一成果阐明，MEG3水平可成为胃癌的确诊根据。和对照组比较，MGC-803和BGC-823经转染pcDNA-MEG3后，其间p53的表达显着添加（P<0.05）。这一成果充分阐明，进步MGC-803和BGC-823细胞中的MEG3水平有助于进步p53的表达，或许提示MGC-803和BGC-823MEG3在胃癌发作开展中或许经过促进p53的激活而发挥抑癌效果[20-23]。

由此可知，胃癌安排和细胞中的MEG3下降能够按捺p53蛋白的激活，然后导致胃癌细胞增殖，影响胃癌的开展进程。当然，MEG3水平对胃癌细胞增殖的影响或许不只仅限于p53，所以还有待进行更深化的后续研讨。

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（收稿日期：2015-12-02）