大鼠血清制备：逍遥散含药血清对未孕大鼠离体子宫平滑肌的效果研讨

海青山++杨榆青++郑梅

摘要：意图调查逍遥含药血清对正常大鼠离体子宫平滑肌运动的影响，并评论其效果机制。办法运用Powerlab生物信号系统记载大鼠离体子宫肌标本的活动，调查不同浓度组逍遥散含药血清对子宫平滑肌缩短时刻、最大张力、子宫活动力的影响。成果：逍遥散含药血清对正常大鼠离体子宫肌有显着的振奋效果，可增强其缩短时刻、最大张力和子宫活动力（与空白血清组比较，P<0.01），且振奋效果强度与含药血清的浓度有相关性（高浓度和低浓度血清组比较P<0.05）。逍遥散含药血清的这一效果可被异搏定和阿托品阻断（与血清组比较P<0.01）。定论逍遥散含药血清在体外可增强正常家兔子宫平滑肌的缩短，该效果可能是经过L型钙通道和M受体发挥效果。

关键词：逍遥散；含药血清；子宫肌标本

中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-2349（2016）11-0077-03

逍遥散源于宋代《和平惠民和剂局方》，其方药组成为：柴胡、芍药、白术、茯苓、当归、生姜、薄荷、甘草，具有疏肝解郁、养血健脾的效果。临床上逍遥散广泛用于医治肝郁血虚脾弱所造成的的各科疾病，尤其是各种妇科疾病[1-3]。现代药理研讨发现逍遥散具有抗抑郁症及肠易激综合症、抗癌、防治肝纤维化、调理神经内分泌等多方面效果[4-6]。本试验用血清药理学的办法研讨逍遥散含药血清对离体子宫肌的效果，并对其效果机制进行评论。

1制备逍遥散含药血清

1.1资料

1.1.1药品逍遥散原方不变，药物剂量参阅《方剂学》教材第六版：柴胡、当归、芍药、白术、茯苓各9 g，甘草4.5 g，烧生姜一块，薄荷少量。所用生药经判定，均为正品。

1.1.2动物SPF级未孕SD大鼠（昆明医学院试验动物中心，动物合格证号：SCXK（滇）2011-2014），体重180±30 g，本院动物房养殖，一般饲料，自主饮食。

1.1.3仪器离心机、恒温水浴锅（DZKW-C；北京光亮医疗仪器厂）。

1.2办法

1.2.1逍遥散水煎剂制备和浓缩上述八味药用六倍于生药量的水浸泡30 min，别离按20、15、15 min煎煮3次，用六层纱布过滤，并浓缩成每1 mL含5.2 g 、2.6 g生药量的药液，置于4℃冰箱中储存备用。

1.2.2分组给药SPF级未孕SD大鼠60只，随机分为空白血清组，0.9%生理盐水；含药血清高浓度组，5.2 g/mL逍遥散水煎剂；含药血清低浓度组，2.6 g/mL逍遥散水煎剂。经灌胃途径给药，1.5 mL/100 g/次，每天2次，接连3 d。

1.3.3逍遥散含药血清制备于第3日末次给药后腹腔打针25%乌拉坦（4 mL/kg），并于给药后60 min腹子宫采血，静置30 min后，以3000转∕分速度离心10 min，取上清液，分装，-20℃保存待用，用前56℃30 min灭活。

2逍遥散含药血清对大鼠离体子宫肌的效果

2.1资料

2.1.1试剂垂体后叶素（上海榜首生化药业有限公司，批号：060403）、己烯雌酚（合肥久联制药有限公司，批号：060301）、消炎痛（山西太原药业有限公司，批号：071202）、酚妥拉明（诺华制药，批号：060156）、阿托品（天津药业集团新郑股份有限公司，批号：060413）、苯海拉明（天津药业集团新郑股份有限公司，批号：0702051）、异搏定（江苏四环生物股份有限公司，批号：0707131）、洛氏液（NaCl 9g，KCl 0.42g，CaCl2 0.24g，NaHCO3 0.2g，Glucose.l 0g，蒸馏水1000mL）。

2.1.2仪器Powerlab/8s生物信号收集处理系统（澳大利亚埃德公司）、张力换能器（澳大利亚埃德公司，类型：ML784）、循环灌流恒温平滑肌槽、离心机、冰箱、电子天平、哺乳动物手术器械等。

2.1.3动物SPF级未孕SD大鼠8只（昆明医学院试验动物中心，动物合格证号：SCXK（滇）2011-2014），体重180±30g，本院动物房养殖，一般饲料，自主饮食。

2.2办法

2.2.1大鼠子宫平滑肌标本的制备将未孕雌性大鼠于试验前两天，每天皮下打针己烯雌酚0.1mg/kg，促进动物处于动情期或动情前期，以进步动物对药物的敏感性。第3天，末次促情1h后，用颈椎脱臼法敏捷处死大鼠，剖腹取出子宫，当即将其浸入到盛有洛氏液的平皿中，漂洗，别离周围的脂肪组织，制生长约1.0cm的子宫平滑肌条，放入洛氏液中待用。

2.2.2离体试验将子宫肌标本悬挂于含（37.5士0.5℃，pH=7.4）洛氏营养液的恒温平滑肌槽中，一端固定于浴槽底部，另一端与张力换能器衔接。向恒温平滑肌槽中通入含有95%O2和5%CO2的混合气体，给予标本1 g的根底张力，平衡30 min（每10min换液一次），先调查标本的缩短状况，并用微机程控的Powerlab/8 s生物信号系统记载缩短曲线，再顺次参加所取的空白血清和含药血清，调查其对标本的影响，记载缩短曲线。每进行一次试验后，用洛氏液冲刷标本3次，使标本张力康复至基线再进行下一次试验。试验中所用药物浓度均以终究浴槽浓度核算。

3成果

3.1不同浓度逍遥散含药血清对未孕大鼠子宫平滑肌缩短的影响在离体子宫肌自发缩短的根底上，别离参加空白血清组、高浓度逍遥散含药血清组（含生药5.2 g/mL）、低浓度逍遥散含药血清组（含生药2.6 g/mL）及垂体后叶素，调查大鼠离体子宫肌缩短时刻（s/10 min）、张力（g）、活动力（g·s/10 min 活动力=张力×缩短时刻）的改变（成果见表1）。

3.2阻断剂加逍遥散含药血清对大鼠离体子宫平滑肌活动的效果以高浓度逍遥散含药血清组效果为对照，别离参加阿托品、苯海拉明、酚妥拉明和异搏定，每组参加阻断剂后5min待缩短活动平稳后，再参加0.5ml的高浓度逍遥散含药血清。调查上述阻断剂对未孕大鼠离体子宫平滑肌缩短时刻（s/10 min）、缩短张力（g）、活动力（g·s/10min 活动力=缩短起伏×缩短时刻）的效果（成果见表2）。

成果表明：异搏定（L型Ca2+通道拮抗剂）、阿托品（M型受体阻断剂）均可部分阻断逍遥散含药血清的振奋效果，削减子宫平滑肌的缩短时刻、张力和子宫活动力，与含药血清组比较，差异有显著性含义（P<0.05或P<0.01）。苯海拉明（Hl型受体阻断剂）、酚妥拉明（α受体阻断剂）均未能阻断逍遥散含药血清的振奋效果。

4评论

逍遥散为疏肝解郁的代表方，肝藏血，主舒泄，喜条达，妇科疾病多从肝论治。逍遥散在临床广泛使用于月经不调、痛经、功血等妇科疾病的医治。据此揣度该方对子宫平滑肌的运动具有调理效果，经过中药复方含药血清对离体器官的效果，能更好地反映药物在体内环境中发生药理效应的实在进程[7]。

试验成果表明，逍遥散含药血清确实能够振奋未孕大鼠子宫肌的运动，在子宫最大缩短张力和缩短时刻方面都体现显着，在免除子宫缩短无力、子宫缩短缓慢等方面有效果。排出血清华夏有的物质搅扰，这种效果依然存在，阐明该效果是逍遥散自身或许代谢产品或许影响机体发生的内源物质导致的[8]。并且，具有浓度依赖性，在给药浓度增高时，效果也加强。

在高浓度逍遥散含药血清导致离体子宫平滑肌缩短加强的根底上，别离以阿托品、苯海拉明、酚妥拉明和异搏定等阻断剂搅扰。子宫肌归于内脏平滑肌，其缩短出现必定的节律性，子宫缩短时需求细胞外Ca2+经过钙通道内流，与肌钙蛋白结合，促进粗细肌丝滑行，引起缩短。使用异搏定（L型Ca2+通道拮抗剂）可部分阻断逍遥散含药血清的振奋效果，削减子宫平滑肌的张力证明逍遥散能够经过振奋L型Ca2+通道起效果。子宫肌存在乙酰胆碱受体，乙酰胆碱经过子宫肌受体发挥振奋效果。阿托品是M型受体阻断剂，对逍遥散含药血清振奋离体子宫肌有抑制效果，阐明逍遥散含药血清中含有相似乙酰胆碱的影响物，逍遥散可能影响机体发生乙酰胆碱等内源性物质增多而振奋子宫。

苯海拉明和酚妥拉明未能阻断逍遥散含药血清的振奋效果阐明组胺和去甲肾上腺素可能没有参加逍遥散对子宫的调理效果。

5定论

上述研讨成果表明，子宫是逍遥散效果的靶器官之一。逍遥散含药血清对未孕大鼠离体子宫平滑肌具有振奋效果，可添加子宫平滑肌缩短的最大张力、缩短时刻及子宫活动力。逍遥散含药血清对离体子宫平滑肌的振奋效果存在量效联系。逍遥散含药血清对未孕大鼠离题子宫平滑肌的振奋效果，可能是经过振奋L型Ca2+通道添加Ca2+内流，进而添加细胞内Ca2+浓度发挥效果。也可能与影响机体发生乙酰胆碱，振奋M型受体发挥效果，与H受体和α受体无关。逍遥散促进子宫活动，可能是其医治产后子宫缩短不良性等疾病的根底，详细效果途径和机制有待于进一步研讨。参阅文献：

[1]陈煜华.逍遥散加减医治妇科疾病[J].湖北中医杂志，2005，27（11）：44.

[2]李永琼.逍遥散加味医治子宫肌瘤78例[J].四川中医，2003，21（12）：57.

[3]曹秀云，程爱萍.逍遥散临床使用现状[J].我国民间疗法，2005，13（11）：60-61.

[4]吴丽丽，徐志伟，严灿，等.逍遥散和丹栀逍遥散抗抑郁效果的试验研讨[J].中医研讨，2003，16（3）：14-15.

[5]王迪，张虹，付士波，王珈.逍遥散对乳腺癌细胞抑制效果试验研讨[J].中医药学刊，2006，4（24）：643-644.

[6]黄莉，金若敏.逍遥散药理研讨概略[J].上海中医药杂志，2003，09（9）：61-64.

[7]杨彦芳，王玉芹 中药复方血清药理学办法规范化评论[J].我国中西医结合杂志，2000，20（5）：380.

[8]刘建勋，韩笑，孙宇扬.含药血清药理效果与体内给药的量效、时效联系研讨[J].我国中药杂志，2006，10（31）：859.